| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1.1 哺乳动物不同生理阶段钙代谢特点 | 第14-18页 |
| 1.1.1 哺乳动物妊娠期钙代谢研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.2 哺乳动物泌乳期钙代谢研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2 哺乳动物不同钙代谢途径研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2.1 肠道钙代谢 | 第18-19页 |
| 1.2.2 肾脏中钙代谢 | 第19页 |
| 1.2.3 骨骼中钙代谢 | 第19-20页 |
| 1.2.4 乳腺组织中钙代谢 | 第20页 |
| 1.3 5-HT在动物钙代谢中的作用 | 第20-23页 |
| 1.3.1 5-HT的生物合成 | 第21-22页 |
| 1.3.2 5-HT的受体组成 | 第22页 |
| 1.3.3 5-HT在乳腺中调控钙循环代谢 | 第22-23页 |
| 1.4 产前挤奶在动物钙代谢中的作用 | 第23页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第23-25页 |
| 第二章 注射5-HTP和产前挤奶对围产期奶山羊钙循环的影响 | 第25-35页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-26页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第25-26页 |
| 2.1.2 试验材料及试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 主要设备仪器 | 第26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-28页 |
| 2.2.1 ELISA测定血清及乳样中5-HT浓度 | 第26-27页 |
| 2.2.2 ELISA测定血清及乳样中PTHrP浓度 | 第27页 |
| 2.2.3 血清及乳中Ca浓度测定 | 第27-28页 |
| 2.2.4 数据分析 | 第28页 |
| 2.3 结果分析 | 第28-33页 |
| 2.3.1 围产期奶山羊分娩前后血液及乳中5-HT、PTHrP、Ca浓度变化 | 第28-29页 |
| 2.3.2 围产期奶山羊分娩前后血清中5-HT、PTHrP、Ca浓度间相关关系 | 第29页 |
| 2.3.3 围产期奶山羊分娩前后羊奶中5-HT、PTHrP、Ca浓度间相关关系 | 第29-30页 |
| 2.3.4 注射5-HTP对围产期奶山羊血液及羊奶中5-HT、PTHrP、Ca浓度影响 | 第30页 |
| 2.3.5 产前挤奶处理奶山羊分娩后0-3d血清及羊奶中5-HT、PTHrP、Ca变化 | 第30-32页 |
| 2.3.6 奶山羊产前挤奶对其血液及羊奶中5-HT、PTHrP、Ca浓度影响 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-34页 |
| 2.5 本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 山羊乳腺上皮细胞TPH1基因敲除细胞系的构建 | 第35-44页 |
| 3.1 试验材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 细胞、质粒和主要试剂 | 第35-36页 |
| 3.1.2 主要设备仪器 | 第36页 |
| 3.2 试验方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 sgRNA靶位点设计与寡核苷酸链的合成 | 第36页 |
| 3.2.2 pX458-sgRNA及pX459-sgRNA载体构建 | 第36-37页 |
| 3.2.3 原代山羊乳腺上皮细胞培养、转染及阳性细胞筛选 | 第37页 |
| 3.2.4 单克隆细胞筛选 | 第37-38页 |
| 3.2.5 Westernblot检测TPH1基因表达 | 第38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-42页 |
| 3.3.1 sgRNA寡核苷酸序列合成并构建pCAS-sgRNA载体 | 第38-39页 |
| 3.3.2 载体质粒转染效率鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3.3 TPH1基因敲除单克隆细胞筛选 | 第40-41页 |
| 3.3.4 pX459-sg2-SC5突变型检测 | 第41页 |
| 3.3.5 pCas-sg2脱靶位点检测 | 第41页 |
| 3.3.6 Westernblot检测TPH1蛋白表达 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-43页 |
| 3.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 5-HT对山羊乳腺上皮细胞中钙代谢的影响 | 第44-52页 |
| 4.1 试验材料 | 第44-46页 |
| 4.1.1 试验材料及试剂 | 第44-45页 |
| 4.1.2 主要设备仪器 | 第45页 |
| 4.1.3 主要试剂配方 | 第45-46页 |
| 4.2 试验方法 | 第46-48页 |
| 4.2.1 山羊乳腺上皮细胞的培养 | 第46页 |
| 4.2.2 外源5-HTP处理正常山羊乳腺上皮细胞及TPH1基因敲除山羊乳腺上皮细胞 | 第46页 |
| 4.2.3 细胞中总RNA的提取(Trizoal法) | 第46页 |
| 4.2.4 实时定量PCR | 第46-47页 |
| 4.2.5 总蛋白提取及Westernblot检测基因表达 | 第47页 |
| 4.2.6 激光共聚焦成像技术检测细胞内Ca水平 | 第47-48页 |
| 4.2.7 统计分析 | 第48页 |
| 4.3 结果分析 | 第48-50页 |
| 4.3.1 5-HT在山羊乳腺上皮细胞中对PTHrP的调控作用 | 第48页 |
| 4.3.2 5-HT对钙转运关键基因表达的调控作用 | 第48-49页 |
| 4.3.3 5-HT对山羊乳腺上皮细胞中钙水平的影响 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-51页 |
| 4.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 缩略词及中英文对照 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
