| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 miRNA | 第12-17页 |
| 1.1.1 miRNA功能简介 | 第12页 |
| 1.1.2 miRNA的生物发生 | 第12-13页 |
| 1.1.3 早期胚胎miRNA簇 | 第13页 |
| 1.1.4 miRNA在维持小鼠胚胎干细胞多能性中的作用 | 第13-14页 |
| 1.1.5 小鼠ES细胞中的功能性miRNA | 第14-15页 |
| 1.1.6 Myc调控的miRNAs有助于干细胞的维持和分化 | 第15页 |
| 1.1.7 miRNA与疾病 | 第15-16页 |
| 1.1.7.1 miRNAs和癌症 | 第15-16页 |
| 1.1.7.2 miRNAs和病毒 | 第16页 |
| 1.1.8 miR-211功能简述 | 第16-17页 |
| 1.2 Meis | 第17-18页 |
| 1.2.1 Meis1基因 | 第17页 |
| 1.2.2 Meis1蛋白 | 第17页 |
| 1.2.3 Meis1功能简介 | 第17-18页 |
| 1.2.4 Meis1与GSK- | 第18页 |
| 1.3 Wnt信号通路与CHIR | 第18-19页 |
| 1.3.1 Wnt信号通路简介 | 第18页 |
| 1.3.2 CHIR99021功能简介 | 第18-19页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 第二章 CHIR99021对F9细胞miR-211表达的调控 | 第20-24页 |
| 2.1 试验材料与试剂 | 第20页 |
| 2.1.1 细胞 | 第20页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 试验仪器与耗材 | 第20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-22页 |
| 2.2.1 溶液配制 | 第20页 |
| 2.2.2 F9细胞的培养 | 第20-21页 |
| 2.2.3 小分子处理细胞 | 第21页 |
| 2.2.4 细胞总RNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.5 miR-211的定量 | 第22页 |
| 2.3 试验结果 | 第22页 |
| 2.4 讨论 | 第22-24页 |
| 第三章 miR-211对F9细胞中多能性因子的调节作用 | 第24-31页 |
| 3.1 试验材料与试剂 | 第24页 |
| 3.1.1 细胞 | 第24页 |
| 3.1.2 试验试剂 | 第24页 |
| 3.1.3 试验仪器与耗材 | 第24页 |
| 3.2 试验方法 | 第24-27页 |
| 3.2.1 溶液配制 | 第24-25页 |
| 3.2.2 脂质体转染 | 第25页 |
| 3.2.3 细胞总RNA的提取 | 第25页 |
| 3.2.4 细胞总蛋白的提取 | 第25-26页 |
| 3.2.5 实时定量PCR | 第26页 |
| 3.2.6 westernblot | 第26页 |
| 3.2.7 免疫荧光 | 第26-27页 |
| 3.3 试验结果 | 第27-29页 |
| 3.4 讨论 | 第29-31页 |
| 第四章 miR-211靶基因的预测及验证 | 第31-42页 |
| 4.1 试验材料与试剂 | 第31页 |
| 4.1.1 细胞、菌株与质粒 | 第31页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第31页 |
| 4.1.3 试验仪器与耗材 | 第31页 |
| 4.2 试验方法 | 第31-37页 |
| 4.2.1 溶液配制 | 第31-32页 |
| 4.2.2 生物信息学分析 | 第32页 |
| 4.2.3 实时定量PCR | 第32页 |
| 4.2.4 载体构建 | 第32-36页 |
| 4.2.4.1 引物设计 | 第32-33页 |
| 4.2.4.2 PCR及胶回收 | 第33页 |
| 4.2.4.3 载体和目的片段双酶切 | 第33-34页 |
| 4.2.4.4 酶切回收 | 第34页 |
| 4.2.4.5 目的片段和载体的连接 | 第34页 |
| 4.2.4.6 转化、涂板、挑菌、摇菌 | 第34页 |
| 4.2.4.7 重组质粒的鉴定、测序 | 第34-35页 |
| 4.2.4.8 重叠延伸PCR | 第35-36页 |
| 4.2.4.9 质粒去内毒 | 第36页 |
| 4.2.5 双荧光素酶报告 | 第36-37页 |
| 4.3 试验结果 | 第37-40页 |
| 4.3.1 靶基因的预测 | 第37-38页 |
| 4.3.2 靶基因的验证 | 第38-40页 |
| 4.3.2.1 Meis1报告载体的构建 | 第38-40页 |
| 4.3.2.2 对靶基因Meis1进行验证 | 第40页 |
| 4.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第五章 靶基因功能的探究 | 第42-49页 |
| 5.1 试验材料与试剂 | 第42-43页 |
| 5.1.1 细胞、菌株与质粒 | 第42页 |
| 5.1.2 试验试剂 | 第42页 |
| 5.1.3 试验仪器与耗材 | 第42-43页 |
| 5.2 试验方法 | 第43-44页 |
| 5.2.1 溶液配制 | 第43页 |
| 5.2.2 Meis1表达载体构建 | 第43页 |
| 5.2.3 小分子CHIR处理F9细胞 | 第43页 |
| 5.2.4 脂质体转染 | 第43-44页 |
| 5.3 试验结果 | 第44-48页 |
| 5.3.1 CHIR处理后,F9细胞中Meis1的表达变化 | 第44页 |
| 5.3.2 Meis1表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 5.3.3 过表达Meis1后检测多能性因子的表达变化 | 第45-46页 |
| 5.3.4 Meis1三个干扰片段的干扰效率验证 | 第46-47页 |
| 5.3.5 干扰Meis1,F9细胞中多能性因子的表达变化 | 第47-48页 |
| 5.4 讨论 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-59页 |
| 作者简介 | 第59页 |
