| 摘要 | 第2-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第一章 前言 | 第8-20页 |
| 1.1 生物农药 | 第8-9页 |
| 1.2 植物根际促生细菌和假单胞菌 | 第9-10页 |
| 1.3 抗生素在生物防治中的作用 | 第10-13页 |
| 1.4 吩嗪类化合物合成及调控 | 第13-16页 |
| 1.5 绿针假单胞菌GP72 研究进展 | 第16-18页 |
| 1.6 工作目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 绿针假单胞菌 GP72 吩嗪合成基因簇的克隆 | 第20-31页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20-26页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.2 酶类及DNA Marker | 第21页 |
| 2.1.3 主要培养基及试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 绿针假单胞菌GP72 中吩嗪合成基因簇的扩增 | 第22-25页 |
| 2.1.4.1 GP72 基因组DNA 的提取 | 第22页 |
| 2.1.4.2 聚合酶链式（PCR）反应 | 第22-23页 |
| 2.1.4.3 半随机PCR 扩增基因簇上下游未知序列 | 第23-24页 |
| 2.1.4.4 电泳定性检验DNA | 第24页 |
| 2.1.4.5 PCR 产物的回收纯化 | 第24-25页 |
| 2.1.5 吩嗪合成基因簇的载体克隆及测序 | 第25-26页 |
| 2.1.5.1 DH5α感受态细胞的制备、转化 | 第25页 |
| 2.1.5.2 PCR 产物连接克隆载体 | 第25页 |
| 2.1.5.3 感受态细胞转化 | 第25-26页 |
| 2.1.5.4 质粒提取 | 第26页 |
| 2.2 结果 | 第26-28页 |
| 2.2.1 吩嗪合成基因簇保守区域的克隆 | 第26-28页 |
| 2.2.2 吩嗪合成基因簇上下游未知序列的克隆 | 第28页 |
| 2.3 讨论与分析 | 第28-31页 |
| 第三章 rpeA 基因的突变及其功能研究 | 第31-41页 |
| 3.1 材料与方法 | 第31-35页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第31-32页 |
| 3.1.2 酶类及DNA Marker | 第32页 |
| 3.1.3 主要培养基及试剂 | 第32页 |
| 3.1.4 体外构建突变质粒 | 第32-34页 |
| 3.1.4.1 PCR 扩增条件 | 第32-33页 |
| 3.1.4.2 酶切、连接 | 第33-34页 |
| 3.1.5 双亲杂交构造基因突变株 | 第34页 |
| 3.1.6 生长曲线测定及抗生素提取和定量测定 | 第34-35页 |
| 3.1.6.1 菌体生长曲线测定 | 第34页 |
| 3.1.6.2 菌株的发酵培养条件 | 第34页 |
| 3.1.6.3 活性物质提取和测定方法 | 第34-35页 |
| 3.1.7 菌株运动性实验 | 第35页 |
| 3.2 结果 | 第35-40页 |
| 3.2.1 体外突变质粒的获得 | 第35-36页 |
| 3.2.2 双亲杂交构建rpeA 基因突变株 | 第36页 |
| 3.2.3 rpeA 基因对于假单胞菌GP72 生长的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.4 rpeA 基因对于假单胞菌GP72 色素生产能力的影响 | 第37-38页 |
| 3.2.5 rpeA 基因对于假单胞菌GP72 运动性的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.6 反应中间产物2-OH-PCA 的确定 | 第39-40页 |
| 3.3 讨论分析 | 第40-41页 |
| 第四章 phzO 基因的突变及其功能研究 | 第41-50页 |
| 4.1 材料与方法 | 第41-43页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第41-42页 |
| 4.1.2 酶类及DNA Marker | 第42页 |
| 4.1.3 主要培养基及试剂 | 第42页 |
| 4.1.4 突变菌株构建 | 第42页 |
| 4.1.5 PCR 扩增条件及酶切条件 | 第42-43页 |
| 4.2 结果 | 第43-48页 |
| 4.2.1 体外突变质粒的获得 | 第43-44页 |
| 4.2.2 双亲杂交构建phzO 基因突变株 | 第44-45页 |
| 4.2.3 phzO 基因对于假单胞菌GP72 生长的影响 | 第45页 |
| 4.2.4 phzO 基因对于假单胞菌GP72 色素生产能力的影响 | 第45-46页 |
| 4.2.5 phzO 基因对于假单胞菌GP72 运动性的影响 | 第46-47页 |
| 4.2.6 phzO 基因对于GP72 产抗生素的影响 | 第47-48页 |
| 4.3 讨论分析 | 第48-50页 |
| 第五章 吩嗪类抗生素产量的提高 | 第50-60页 |
| 5.1 材料与方法 | 第50-51页 |
| 5.1.1 实验菌种 | 第50页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第50页 |
| 5.1.3 活性物质提取与抗生素的定量分析 | 第50页 |
| 5.1.4 基因突变对于GP72 中抗生素产量的影响 | 第50-51页 |
| 5.1.5 培养环境对于GP72 产抗生素的影响 | 第51页 |
| 5.1.6 外源添加PCA 对于GP72 产抗生素的影响 | 第51页 |
| 5.2 结果 | 第51-57页 |
| 5.2.1 抗生素的定量分析 | 第51-52页 |
| 5.2.2 基因突变对于GP72 中抗生素的影响 | 第52-53页 |
| 5.2.3 培养环境对于GP72 产抗生素的影响 | 第53-54页 |
| 5.2.4 外源添加PCA 对于GP72 产抗生素的影响 | 第54-57页 |
| 5.3 本章小结 | 第57-60页 |
| 第六章 总结与展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 1 实验中所用的仪器设备 | 第68-69页 |
| 附录 2 菌株 GP72 吩嗪合成基因簇测序结果 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
