| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 符号与缩略语说明 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-23页 |
| 1 有机磷类农药及毒死蜱简介 | 第13-14页 |
| 1.1 有机磷类农药简介 | 第13页 |
| 1.2 毒死蜱简介 | 第13-14页 |
| 2 有机磷类农药及毒死蜱在环境中的降解 | 第14-17页 |
| 2.1 有机磷类农药在环境中的降解 | 第14-15页 |
| 2.2 毒死蜱在环境中的降解 | 第15-17页 |
| 3 国内外毒死蜱生物降解的研究进展 | 第17-18页 |
| 4 有机磷降解酶基因与功能 | 第18-19页 |
| 5 微生物降解有机磷农药的展望 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-23页 |
| 实验部分 | 第23-63页 |
| 第一章 毒死蜱降解菌株D-8的分离、鉴定及生长特性研究 | 第23-39页 |
| 第一节 毒死蜱降解菌株D-8的分离和鉴定 | 第23-30页 |
| 1 材料与方法 | 第23-27页 |
| 1.1 供试土样、菌株、试剂及仪器 | 第23-24页 |
| 1.1.1 供试土样 | 第23页 |
| 1.1.2 供试农药及试剂 | 第23-24页 |
| 1.1.3 培养基 | 第24页 |
| 1.1.4 仪器 | 第24页 |
| 1.2 降解菌株的富集和分离 | 第24页 |
| 1.3 降解菌株的培养特性及生理生化鉴定 | 第24页 |
| 1.4 毒死蜱降解菌株16S rRNA基因序列的PCR扩增及测序 | 第24-26页 |
| 1.4.1 菌株基因组总DNA的提取 | 第24-25页 |
| 1.4.2 降解菌株16S rRNA基因的PCR扩增 | 第25页 |
| 1.4.3 PCR产物的T/A克隆 | 第25页 |
| 1.4.4 普通感受态细胞的制备和转化 | 第25-26页 |
| 1.4.5 质粒DNA的小量提取 | 第26页 |
| 1.4.6 16S rRNA基因的序列测定 | 第26页 |
| 1.4.7 降解菌株的系统发育分析 | 第26页 |
| 1.5 毒死蜱的检测方法 | 第26-27页 |
| 1.5.1 紫外扫描分析法 | 第26-27页 |
| 1.5.2 高效液相色谱分析法 | 第27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-30页 |
| 2.1 毒死蜱降解菌株的分离 | 第27-28页 |
| 2.2 毒死蜱降解菌株D-8的菌落形态和生理生化特征 | 第28-29页 |
| 2.3 菌株D-8的基因组DNA的提取 | 第29页 |
| 2.4 菌株D-8的系统发育地位 | 第29-30页 |
| 第二节 毒死蜱降解菌株D-8的生长特性研究 | 第30-37页 |
| 1 材料与方法 | 第30-32页 |
| 1.1 菌株、试剂与培养基 | 第30-31页 |
| 1.2 菌体生长量的测定 | 第31页 |
| 1.3 不同环境条件对菌株D-8生长的影响 | 第31-32页 |
| 1.3.1 培养温度对菌株D-8生长的影响 | 第31页 |
| 1.3.2 初始pH值对菌株D-8生长的影响 | 第31页 |
| 1.3.3 不同碳源对菌株D-8生长的影响 | 第31页 |
| 1.3.4 不同氮源对菌株D-8生长的影响 | 第31页 |
| 1.3.5 通气量对菌株D-8生长的影响 | 第31-32页 |
| 1.3.6 NaCl浓度对菌株D-8生长情况的影响 | 第32页 |
| 1.3.7 菌株对抗生素的耐受性 | 第32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-37页 |
| 2.1 温度对菌株D-8生长的影响 | 第32页 |
| 2.2 初始pH对菌株D-8生长的影响 | 第32-33页 |
| 2.3 不同碳源对菌株D-8生长的影响 | 第33-34页 |
| 2.4 不同氮源对菌株D-8生长的影响 | 第34页 |
| 2.5 通气量对菌株D-8生长的影响 | 第34-35页 |
| 2.6 NaCl浓度对菌株D-8生长情况的影响 | 第35页 |
| 2.7 菌株对抗生素的耐受性 | 第35-36页 |
| 3 本章小结 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-39页 |
| 第二章 菌株D-8对毒死蜱降解特性的研究 | 第39-45页 |
| 1 材料与方法 | 第39-40页 |
| 1.1 培养基与试剂、菌株 | 第39页 |
| 1.1.1 培养基与试剂 | 第39页 |
| 1.1.2 菌株 | 第39页 |
| 1.2 菌种的制备 | 第39页 |
| 1.3 毒死蜱的提取及检测方法 | 第39-40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-44页 |
| 2.1 菌株D-8对毒死蜱降解曲线的绘制 | 第40页 |
| 2.2 温度对菌株D-8降解毒死蜱的影响 | 第40-41页 |
| 2.3 培养基初始pH值对菌株D-8降解毒死蜱的影响 | 第41-42页 |
| 2.4 毒死蜱初始浓度对菌株D-8降解毒死蜱的影响 | 第42页 |
| 2.5 接种量对菌株D-8降解毒死蜱的影响 | 第42-43页 |
| 2.6 金属离子对菌株D-8降解毒死蜱的影响 | 第43-44页 |
| 2.7 菌株D-8对不同有机磷农药的降解情况 | 第44页 |
| 3 本章小结 | 第44-45页 |
| 第三章 有机磷水解酶基因(mpd)的克隆 | 第45-57页 |
| 1 材料与方法 | 第45-48页 |
| 1.1 培养基与试剂、供试菌株 | 第45-46页 |
| 1.1.1 培养基与试剂 | 第45页 |
| 1.1.2 供试菌株和质粒 | 第45-46页 |
| 1.2 菌体基因组DNA的提取 | 第46页 |
| 1.3 质粒DNA的小量提取 | 第46页 |
| 1.4 感受态细胞的制备 | 第46页 |
| 1.5 有机磷水解酶基因的PCR扩增 | 第46-47页 |
| 1.6 酶连及酶连产物的转化 | 第47-48页 |
| 1.7 序列测定与分析 | 第48页 |
| 1.8 有机磷水解酶基因表达载体的构建与酶活力分析 | 第48页 |
| 1.8.1 表达载体的构建 | 第48页 |
| 1.8.2 酶活力分析 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-54页 |
| 2.1 PCR法克隆有机磷水解酶基因 | 第48-49页 |
| 2.2 序列测定与比较分析 | 第49-52页 |
| 2.3 mpd基因的表达和酶活力分析 | 第52-54页 |
| 2.3.1 重组表达载体的构建 | 第52-54页 |
| 2.3.2 粗酶酶活检测 | 第54页 |
| 3 本章小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 第四章 有机磷水解酶基因(mpd)的侧翼序列扩增及分析 | 第57-63页 |
| 1 材料与方法 | 第57-59页 |
| 1.1 培养基与试剂、供试菌株 | 第57-58页 |
| 1.1.1 培养基与试剂 | 第57页 |
| 1.1.2 供试菌株和质粒 | 第57-58页 |
| 1.2 菌株基因组DNA与质粒DNA的提取 | 第58页 |
| 1.3 侧翼序列SEFA-PCR引物设计和扩增 | 第58-59页 |
| 1.4 酶连及酶连产物的转化 | 第59页 |
| 1.5 序列测定与分析 | 第59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-60页 |
| 2.1 mpd结构基因上游序列的扩增及分析 | 第59页 |
| 2.2 mpd结构基因下游序列的扩增及分析 | 第59-60页 |
| 3 本章小结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 全文总结 | 第63-65页 |
| 本论文的创新点及不足之处 | 第65-67页 |
| 附录一 文中所用试剂配方 | 第67-68页 |
| 附录二 相关DNA序列 | 第68-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表或已接受的学术论文 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
