| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第11-26页 |
| 1.1 研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2 副猪嗜血杆菌简介 | 第12-16页 |
| 1.2.1 副猪嗜血杆菌发现历史 | 第12页 |
| 1.2.2 副猪嗜血杆菌的基本特征 | 第12-13页 |
| 1.2.3 副猪嗜血杆菌的毒力因子 | 第13页 |
| 1.2.4 副猪嗜血杆菌的病原学 | 第13-14页 |
| 1.2.5 副猪嗜血杆菌的流行病学 | 第14-15页 |
| 1.2.6 致病机理 | 第15页 |
| 1.2.7 临床症状 | 第15-16页 |
| 1.2.8 病理变化 | 第16页 |
| 1.3 检测方法研究现状 | 第16-19页 |
| 1.3.1 直接涂片镜检 | 第16页 |
| 1.3.2 细菌的分离培养及培养特性检查 | 第16-17页 |
| 1.3.3 生化试验 | 第17页 |
| 1.3.4 乳胶凝集试验快速检测方法 | 第17页 |
| 1.3.5 免疫组化法诊断 | 第17-18页 |
| 1.3.6 酶联免疫吸附试验 | 第18页 |
| 1.3.7 聚合酶链式反应(PCR) | 第18-19页 |
| 1.4 预防与治疗 | 第19页 |
| 1.4.1 预防 | 第19页 |
| 1.4.2 治疗 | 第19页 |
| 1.5 环介导等温扩增（LAMP）技术 | 第19-26页 |
| 1.5.1 LAMP 法的概述 | 第19页 |
| 1.5.2 LAMP 法的引物设计原理 | 第19-20页 |
| 1.5.3 LAMP 引物设计的注意事项 | 第20页 |
| 1.5.4 LAMP 法的基本原理 | 第20-23页 |
| 1.5.5 LAMP 的反应体系 | 第23页 |
| 1.5.6 扩增结果的检测方法 | 第23-24页 |
| 1.5.7 LAMP 法的应用 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-33页 |
| 2.1 主要试剂与菌株 | 第26-28页 |
| 2.1.1 试验菌株 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第27页 |
| 2.1.4 试验所用溶液及其配制 | 第27-28页 |
| 2.2 菌种的培养 | 第28页 |
| 2.3 涂片镜检 | 第28页 |
| 2.4 细菌 DNA 的提取 | 第28-29页 |
| 2.5 LAMP 及 PCR 引物设计、反应体系及主要操作 | 第29-32页 |
| 2.5.1 PCR 引物设计 | 第30页 |
| 2.5.2 引物的处理 | 第30页 |
| 2.5.3 LAMP 和 PCR 反应体系 | 第30页 |
| 2.5.4 LAMP 扩增法和 PCR 扩增法的操作程序 | 第30-31页 |
| 2.5.5 LAMP 反应条件优化 | 第31-32页 |
| 2.6 LAMP 引物特异性的检测 | 第32页 |
| 2.7 副猪嗜血杆菌的敏感性试验 | 第32页 |
| 2.7.1 LAMP 反应的敏感性试验 | 第32页 |
| 2.7.2 PCR 反应的敏感性试验 | 第32页 |
| 2.8 LAMP 扩增产物的分析 | 第32-33页 |
| 2.8.1 LAMP 扩增产物可视结果的分析 | 第32页 |
| 2.8.2 LAMP 扩增产物凝胶成像分析 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-43页 |
| 3.1 所培养菌株涂片镜检的结果 | 第33页 |
| 3.2 LAMP 反应条件的优化 | 第33-39页 |
| 3.2.1 引物比梯度的优化 | 第33-34页 |
| 3.2.2 镁离子梯度的优化 | 第34-35页 |
| 3.2.3 dNTPs 梯度的优化 | 第35-36页 |
| 3.2.4 Bst DNA 聚合酶的优化 | 第36-37页 |
| 3.2.5 温度梯度的优化 | 第37-38页 |
| 3.2.6 时间梯度优化的结果 | 第38-39页 |
| 3.3 LAMP 特异性的研究 | 第39-40页 |
| 3.4 LAMP 和 PCR 检测副猪嗜血杆菌灵敏度的比较 | 第40-42页 |
| 3.5 荧光染料法对扩增产物的分析 | 第42页 |
| 3.6 LAMP 检测方法的临床应用 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 4.1 靶基因 OMP P2 基因的选择 | 第44页 |
| 4.2 LAMP 反应体系的分析 | 第44-45页 |
| 4.2.1 镁离子浓度 | 第44页 |
| 4.2.2 dNTPs 浓度 | 第44-45页 |
| 4.2.3 甜菜碱 | 第45页 |
| 4.2.4 环引物 | 第45页 |
| 4.2.5 温度对 LAMP 扩增反应的影响 | 第45页 |
| 4.3 LAMP 操作过程中假阳性的问题 | 第45-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 作者简历 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
