| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-14页 |
| 2 人工miRNA抗登革病毒靶点分析 | 第14-36页 |
| 2.1 材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 菌株、病毒株、细胞株与载体 | 第15页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第16页 |
| 2.2 方法 | 第16-22页 |
| 2.2.1 amiRNA的设计 | 第16页 |
| 2.2.2 amiRNA表达载体的构建 | 第16-17页 |
| 2.2.3 慢病毒包装及病毒滴度测定 | 第17-18页 |
| 2.2.4 细胞瞬时转染及登革病毒接种 | 第18页 |
| 2.2.5 慢病毒感染 | 第18页 |
| 2.2.6 细胞形态变化观察 | 第18页 |
| 2.2.7 CCK-8法检测amiRNA的细胞保护作用 | 第18-19页 |
| 2.2.8 间接免疫荧光法检测登革病毒包膜E蛋白的表达 | 第19页 |
| 2.2.9 蚀斑试验检测感染上清登革病毒滴度 | 第19页 |
| 2.2.10 细胞总RNA提取 | 第19-20页 |
| 2.2.11 慢病毒载体干扰素反应检测 | 第20页 |
| 2.2.12 mRNA半定量RT-PCR | 第20-21页 |
| 2.2.13 数据处理与分析 | 第21-22页 |
| 2.3 结果 | 第22-33页 |
| 2.3.1 靶向DENV保守区amiRNA的设计与构建 | 第22-23页 |
| 2.3.2 单条amiRNA序列有效性的初步筛选 | 第23-25页 |
| 2.3.3 串联amiRNA序列有效性的初步筛选 | 第25-28页 |
| 2.3.4 amiRNA序列慢病毒有效性的筛选 | 第28-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-36页 |
| 3 宿主靶向初步筛选抗乙型肝炎病毒宿主靶标 | 第36-54页 |
| 3.1 材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 细胞系、菌株与载体 | 第37页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第37-38页 |
| 3.2 方法 | 第38-42页 |
| 3.2.1 amiRNA的设计 | 第38页 |
| 3.2.2 amiRNA慢病毒表达载体的构建 | 第38页 |
| 3.2.3 细胞瞬时转染 | 第38页 |
| 3.2.4 HBsAg/HBeAg ELISA检测 | 第38-39页 |
| 3.2.5 HBV-DNA的荧光定量PCR检测 | 第39-40页 |
| 3.2.6 细胞增殖检测 | 第40页 |
| 3.2.7 pLNB-AFP-amiRNA慢病毒包装 | 第40页 |
| 3.2.8 HepG2-AFP-amiRNA稳定转染细胞筛选 | 第40页 |
| 3.2.9 RT-PCR检测AFP基因mRNA水平的变化 | 第40-42页 |
| 3.2.10 间接免疫荧光检测AFP表达的变化 | 第42页 |
| 3.2.11 稳转细胞上清AFP定量 | 第42页 |
| 3.2.12 数据处理与分析 | 第42页 |
| 3.3 结果 | 第42-52页 |
| 3.3.1 宿主分子靶向amiRNA的设计与构建 | 第43页 |
| 3.3.2 HepG2细胞瞬时转染筛选宿主靶向amiRNA | 第43-45页 |
| 3.3.3 HepG2细胞瞬时转染AFP-amiRNA筛选验证 | 第45-47页 |
| 3.3.4 HepG2细胞瞬时转染AFP-amiRNA对HBV DNA表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.5 AFP-amiRNA转染对细胞增殖的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.6 AFP-amiRNA-HepG2稳定转染细胞的筛选 | 第49-50页 |
| 3.3.7 RT-PCR检测AFP mRNA的表达 | 第50页 |
| 3.3.8 蛋白水平检测AFP的表达 | 第50-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-54页 |
| 4 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 综述 | 第60-67页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果目录 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
