生物催化不对称合成(R)-3-奎宁醇
| 符号说明 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 前言 | 第15-20页 |
| 第一部分 酶表达 | 第20-50页 |
| 1 材料 | 第20-21页 |
| 1.1 仪器 | 第20-21页 |
| 1.2 试剂 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-30页 |
| 2.1 溶液配制 | 第21-24页 |
| 2.2 质粒构建与扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.1 质粒构建 | 第24页 |
| 2.2.2 质粒扩增 | 第24-25页 |
| 2.3 质粒提取与酶切分析 | 第25-26页 |
| 2.3.1 质粒提取 | 第25页 |
| 2.3.2 酶切分析 | 第25-26页 |
| 2.4 质粒转化 | 第26页 |
| 2.5 酶表达及表达条件优化 | 第26-27页 |
| 2.5.1 工程菌的培养及表达 | 第26页 |
| 2.5.2 酶表达条件优化 | 第26-27页 |
| 2.5.2.1 温度对表达的影响 | 第26-27页 |
| 2.5.2.2 IPTG浓度对表达的影响 | 第27页 |
| 2.5.2.3 诱导时间对表达的影响 | 第27页 |
| 2.6 酶纯化及蛋白质浓度测定 | 第27-29页 |
| 2.6.1 Bradford方法 | 第27-28页 |
| 2.6.2 细胞裂解液的制备 | 第28页 |
| 2.6.3 IMAC法纯化蛋白质 | 第28-29页 |
| 2.6.3.1 缓冲液的准备 | 第28页 |
| 2.6.3.2 蛋白质的纯化 | 第28-29页 |
| 2.7 酶活力测定 | 第29-30页 |
| 2.7.1 QNR酶活力测定 | 第29页 |
| 2.7.2 GDH酶活力测定 | 第29-30页 |
| 3 实验结果 | 第30-48页 |
| 3.1 质粒构建及确认 | 第30-37页 |
| 3.2 酶表达及条件优化 | 第37-42页 |
| 3.3 目标蛋白的纯化 | 第42-46页 |
| 3.4 蛋白质浓度测定 | 第46-47页 |
| 3.5 酶活力测定 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 第二部分 (R)-3-奎宁醇的生物合成 | 第50-70页 |
| 1 材料 | 第50-51页 |
| 1.1 仪器 | 第50页 |
| 1.2 试剂 | 第50-51页 |
| 2 方法 | 第51-56页 |
| 2.1 全细胞催化合成（R）-3-奎宁醇 | 第51-54页 |
| 2.1.1 （R）-3-奎宁醇合成 | 第51页 |
| 2.1.2 （R）-3-奎宁醇合成条件优化 | 第51-53页 |
| 2.1.2.1 pH | 第51-52页 |
| 2.1.2.2 温度 | 第52页 |
| 2.1.2.3 底物量 | 第52-53页 |
| 2.1.3 透性化 | 第53-54页 |
| 2.2 固定化酶催化合成（R）-3-奎宁醇 | 第54-55页 |
| 2.2.1 酶固定化 | 第54页 |
| 2.2.2 固定化酶的测定 | 第54页 |
| 2.2.3 固定化酶的生物转化 | 第54-55页 |
| 2.2.4 固定化酶的循环使用 | 第55页 |
| 2.3 含量及结构分析 | 第55-56页 |
| 2.3.1 （R）-3-奎宁醇构型确证 | 第55-56页 |
| 2.3.2 （R）-3-奎宁醇含量测定 | 第56页 |
| 3 实验结果 | 第56-68页 |
| 3.1 （R）-3-奎宁醇的结果确证 | 第56-60页 |
| 3.2 （R）-3-奎宁醇合成条件的优化 | 第60-63页 |
| 3.3 透性化细胞催化合成（R）-3-奎宁醇的 | 第63-65页 |
| 3.4 固定化酶的测定 | 第65页 |
| 3.5 固定化酶的生物转化 | 第65-66页 |
| 3.6 固定化酶的循环使用 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 全文总结 | 第70-71页 |
| 本文创新点和特色 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 附图 | 第76-84页 |
| 文献综述 | 第84-92页 |
| 参考文献 | 第89-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章情况 | 第93页 |
