摘要 | 第4-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
缩略词 | 第14-15页 |
引言 | 第15-17页 |
第一部分:慢病毒介导siRNA-SCN9A对TNF-α刺激原代培养的大鼠脊髓背根神经节细胞高表达Nav1.7 的抑制作用 | 第17-32页 |
1 实验材料 | 第18-20页 |
1.1 实验动物 | 第18页 |
1.2 主要试剂 | 第18-19页 |
1.3 主要仪器设备 | 第19-20页 |
1.4 其它实验用品 | 第20页 |
2 试验方法 | 第20-24页 |
2.1 慢病毒介导的siSCN9A的构建 | 第20页 |
2.2 病毒滴度复核(有限稀释法测定) | 第20-21页 |
2.3 PC12细胞培养 | 第21-22页 |
2.4 大鼠脊髓背根神经节细胞的原代培养并用TNF-α刺激 | 第22页 |
2.5 慢病毒介导的siSCN9A感染PC12细胞、原代培养的DRG神经元细胞 | 第22-23页 |
2.6 NF200免疫荧光标记DRG神经元细胞 | 第23页 |
2.7 细胞总蛋白的提取 | 第23页 |
2.8 蛋白质的含量测定 | 第23-24页 |
2.9 电泳和转膜 | 第24页 |
2.10 细胞免疫荧光 | 第24页 |
3 实验分组 | 第24-25页 |
4 数据统计与分析 | 第25页 |
5 结果 | 第25-27页 |
6 讨论 | 第27-28页 |
7 结论 | 第28页 |
8 参考文献 | 第28-32页 |
第二部分:DRG显微注射慢病毒介导siSCN9A对SNL大鼠神经病理痛的影响 | 第32-53页 |
1 材料 | 第32-35页 |
1.1 实验动物 | 第32-33页 |
1.2 主要仪器 | 第33-34页 |
1.3 手术器械 | 第34页 |
1.4 主要试剂与耗材 | 第34-35页 |
2 主要试剂配制方法 | 第35-37页 |
3 实验方法 | 第37-43页 |
3.1 实验动物分组 | 第37-38页 |
3.2 SNL模型的建立 | 第38页 |
3.3 行为学观察和测定 | 第38-40页 |
3.3.1 一般行为学观察 | 第38-39页 |
3.3.2 机械缩足反射阈值(Mechanical withdrawal threshold, MWT)、热缩足潜伏期(Thermal withdrawal latency,TWL)的测定 | 第39-40页 |
3.4 慢病毒介导的siSCN9A显微注射SNL大鼠DRG神经元 | 第40-41页 |
3.5 L5脊髓、左右两侧DRG及其相连的后跟感觉神经EGFP荧光表达 | 第41页 |
3.5.1 动物标本取材 | 第41页 |
3.5.2 冰冻切片制作 | 第41页 |
3.5.3 观察荧光表达 | 第41页 |
3.6 免疫组化染色 | 第41-42页 |
3.7 Western Blot | 第42-43页 |
3.7.1 总蛋白提取 | 第42-43页 |
3.7.2 蛋白质含量的测定 | 第43页 |
4 数据统计与分析 | 第43页 |
5 结果 | 第43-47页 |
6 讨论 | 第47-50页 |
7 结论 | 第50页 |
8 参考文献 | 第50-53页 |
综述 | 第53-65页 |
参考文献 | 第61-65页 |
个人简历 | 第65-66页 |
致谢 | 第66页 |