| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 转基因作物的发展状况及其安全性 | 第11-13页 |
| 1.1.1 全球转基因作物种植情况 | 第11页 |
| 1.1.2 我国转基因棉花研发和种植情况 | 第11-12页 |
| 1.1.3 转基因作物的安全性 | 第12-13页 |
| 1.2 转基因检测技术研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.1 核酸检测技术 | 第13-14页 |
| 1.2.2 蛋白检测技术 | 第14页 |
| 1.3 转基因作物中BT蛋白的表达 | 第14-16页 |
| 1.3.1 转Bt棉花外源杀虫蛋白的表达 | 第15页 |
| 1.3.2 转Bt水稻外源杀虫蛋白的表达 | 第15-16页 |
| 1.3.3 转Bt玉米外源杀虫蛋白的表达 | 第16页 |
| 1.4 影响转基因作物外源蛋白表达的因素 | 第16-18页 |
| 1.4.1 遗传因素 | 第16-17页 |
| 1.4.2 环境因素 | 第17-18页 |
| 1.5 研究目的和研究内容 | 第18-20页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第18页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第18-19页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 转基因棉花MON757转化体特异性PCR检测方法及应用 | 第20-31页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20-24页 |
| 2.1.1 棉花材料 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第20-21页 |
| 2.1.4 样品制备和棉花基因组DNA提取 | 第21页 |
| 2.1.5 引物和探针设计 | 第21-22页 |
| 2.1.6 定性PCR方法 | 第22-23页 |
| 2.1.7 定量PCR方法 | 第23页 |
| 2.1.8 样品中MON757转化体的检测 | 第23-24页 |
| 2.2 结果与分析 | 第24-29页 |
| 2.2.1 MON757转化体纯杂合定性PCR检测方法的建立 | 第24页 |
| 2.2.2 MON757转化体定量PCR方法的建立 | 第24-27页 |
| 2.2.3 样品中MON757转化体的定性PCR检测 | 第27-29页 |
| 2.2.4 样品中MON757转化体的定量PCR检测 | 第29页 |
| 2.3 讨论和结论 | 第29-31页 |
| 第三章 转基因棉花MON757外源杀虫蛋白表达规律 | 第31-40页 |
| 3.1 材料和方法 | 第31-34页 |
| 3.1.1 棉花材料 | 第31页 |
| 3.1.2 试剂和仪器 | 第31-32页 |
| 3.1.3 实验设计 | 第32页 |
| 3.1.4 棉花单株DNA身份鉴定 | 第32-33页 |
| 3.1.5 外源杀虫蛋白含量的测定 | 第33-34页 |
| 3.1.6 数据处理 | 第34页 |
| 3.2 结果与分析 | 第34-39页 |
| 3.2.1 棉花单株DNA身份鉴定 | 第34-36页 |
| 3.2.2 外源杀虫蛋白含量测定 | 第36-39页 |
| 3.3 讨论与结论 | 第39-40页 |
| 第四章 MON757转化体外源插入片段结构验证 | 第40-47页 |
| 4.1 材料和方法 | 第40-45页 |
| 4.1.1 棉花材料DNA样品 | 第40页 |
| 4.1.2 试剂和仪器 | 第40页 |
| 4.1.3 长链PCR扩增 | 第40-42页 |
| 4.1.4 克隆测序 | 第42-45页 |
| 4.1.4.1 切胶 | 第42-43页 |
| 4.1.4.2 LB培养基的配置 | 第43页 |
| 4.1.4.3 连接 | 第43-44页 |
| 4.1.4.4 转化 | 第44页 |
| 4.1.4.5 接菌至固体 LB 培养基 | 第44页 |
| 4.1.4.6 菌落转移 | 第44页 |
| 4.1.4.7 菌液PCR | 第44页 |
| 4.1.4.8 测序 | 第44-45页 |
| 4.2 结果和分析 | 第45页 |
| 4.3 讨论和结论 | 第45-47页 |
| 第五章 MON757转化体外源基因转录水平分析 | 第47-55页 |
| 5.1 材料和方法 | 第47-50页 |
| 5.1.1 棉花材料 | 第47页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器 | 第47页 |
| 5.1.3 棉花幼苗的种植和取样 | 第47页 |
| 5.1.4 棉花幼苗DNA身份鉴定 | 第47-48页 |
| 5.1.5 棉花叶片中Cry1Ac蛋白含量的测定 | 第48页 |
| 5.1.6 棉花叶片总RNA提取 | 第48-49页 |
| 5.1.7 反转录 | 第49页 |
| 5.1.8 引物探针设计 | 第49-50页 |
| 5.1.9 实时荧光定量PCR | 第50页 |
| 5.1.10 数据处理 | 第50页 |
| 5.2 结果和分析 | 第50-54页 |
| 5.2.1 棉花幼苗的鉴定结果 | 第50-51页 |
| 5.2.2 引物和探针的可靠性验证 | 第51-53页 |
| 5.2.3 转录水平分析 | 第53-54页 |
| 5.3 讨论和结论 | 第54-55页 |
| 第六章 全文结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简历 | 第64页 |
