| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第9-13页 |
| 1 引言 | 第13-16页 |
| 1.1 结直肠癌转移研究现状 | 第13页 |
| 1.2 SIRT1与肿瘤 | 第13-16页 |
| 1.2.1 SIRT1分子概述 | 第13-14页 |
| 1.2.2 SIRT1功能 | 第14页 |
| 1.2.3 SIRT1与肿瘤 | 第14-16页 |
| 1.2.3.1 SIRT1与肿瘤转移 | 第14页 |
| 1.2.3.2 SIRT1与结直肠癌转移 | 第14-16页 |
| 2 实验仪器和材料 | 第16-21页 |
| 2.1 主要仪器和耗材 | 第16-17页 |
| 2.2 主要试剂及药品 | 第17页 |
| 2.3 主要抗体信息 | 第17-18页 |
| 2.4 细胞系及培养条件 | 第18页 |
| 2.5 主要溶液的配制 | 第18-20页 |
| 2.6 反转录PCR引物设计与合成 | 第20-21页 |
| 3 实验方法 | 第21-33页 |
| 3.1 细胞培养和传代 | 第21页 |
| 3.2 慢病毒表达质粒的构建、包装和纯化 | 第21-24页 |
| 3.2.1 慢病毒表达质粒构建 | 第21页 |
| 3.2.2 慢病毒包装质粒与表达质粒的大量抽提 | 第21-22页 |
| 3.2.3 慢病毒包装 | 第22-23页 |
| 3.2.4 慢病毒的收集和纯化 | 第23页 |
| 3.2.5 慢病毒的生物学滴度测定 | 第23页 |
| 3.2.6 慢病毒的感染 | 第23-24页 |
| 3.3 NOD/SCID小鼠体内移植实验 | 第24页 |
| 3.4 免疫组化染色 | 第24-26页 |
| 3.4.1 组织的石蜡包埋及切片 | 第24页 |
| 3.4.2 石蜡切片的免疫组化 | 第24-25页 |
| 3.4.3 目标蛋白表达等级判定 | 第25-26页 |
| 3.5 Transwell侵袭迁移实验 | 第26页 |
| 3.6 划痕实验 | 第26-27页 |
| 3.7 qRT-PCR检测基因mRNA水平表达差异 | 第27-28页 |
| 3.7.1 总RNA的提取 | 第27页 |
| 3.7.2 cDNA的制备 | 第27-28页 |
| 3.7.3 实时PCR技术检测目的基因mRNA水平表达 | 第28页 |
| 3.8 免疫荧光检测基因蛋白水平表达 | 第28-29页 |
| 3.9 Western blot检测基因蛋白水平表达 | 第29-31页 |
| 3.9.1 收集蛋白 | 第29-30页 |
| 3.9.2 SDS-PAGE电泳 | 第30页 |
| 3.9.3 转膜 | 第30-31页 |
| 3.9.4 封闭 | 第31页 |
| 3.9.5 孵育抗体 | 第31页 |
| 3.9.6 显影 | 第31页 |
| 3.10 基因启动子活性检测 | 第31-32页 |
| 3.11 统计学分析 | 第32-33页 |
| 4 实验结果与分析 | 第33-48页 |
| 4.1 SIRT1对结直肠癌细胞体外迁移和侵袭能力的影响 | 第33-36页 |
| 4.1.1 SIRT1的内源表达与结直肠癌细胞的体外迁移能力有关 | 第33-34页 |
| 4.1.2 外源表达SIRT1促进结直肠癌细胞的体外迁移和侵袭 | 第34-35页 |
| 4.1.3 干扰SIRT1抑制结直肠癌细胞的体外迁移和侵袭 | 第35-36页 |
| 4.2 干扰SIRT1对结直肠癌细胞体内转移的影响 | 第36-38页 |
| 4.3 干扰SIRT1对结直肠癌细胞EMT发生的影响 | 第38-41页 |
| 4.4 SIRT1对Fra-1 的调控作用 | 第41-42页 |
| 4.5 Fra-1 在SIRT1调控EMT中的介导作用 | 第42-44页 |
| 4.6 SIRT1和Fra-1 在结直肠癌中的临床病理学意义 | 第44-48页 |
| 5 讨论 | 第48-50页 |
| 6 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附录 | 第58-59页 |
| 攻读硕士研究生期间的研究成果 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
