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Latcripin-13功能域的克隆表达、纯化及其生物学活性研究

中文摘要第10-13页
英文摘要第13-17页
第一部分 Latcripin-13基因序列的获得及蛋白结构分析第18-31页
    (一)前言第18-19页
    (二)材料和方法第19-21页
        1. 材料第19-20页
            1.1 菌株第19页
            1.2 实验仪器第19页
            1.3 实验试剂第19页
            1.4 引物第19-20页
        2. 实验方法第20-21页
            2.1 香菇C91-3 菌株总RNA提取第20页
            2.2 Latcripin-13编码序列(Coding Sequence, CDS)的获得第20页
            2.3 Latcripin-13功能域蛋白结构分析第20-21页
    (三)结果第21-25页
        3.1 Latcripin-13转录组测序产物序列验证第21页
        3.2 3′RACE反应第21-22页
        3.3 5′RACE反应第22页
        3.4 Latcripin-13编码序列(Coding Sequence, CDS)的获得第22-23页
        3.5 Latcripin-13基因序列分析第23页
        3.6 Latcripin-13蛋白结构分析第23-25页
    (四)讨论第25-27页
    (五)结论第27-28页
    (六)参考文献第28-31页
第二部分 pET32a(+)-Latcripin-13功能域表达载体的构建及在Rosetta-gammi(DE3)中的表达第31-46页
    (一)前言第31-32页
    (二)材料和方法第32-39页
        1. 材料第32-33页
            1.1 质粒、菌株第32页
            1.2 实验仪器第32-33页
            1.3 实验试剂第33页
        2. 实验方法第33-39页
            2.1 原核表达载体构建第33-34页
            2.2 重组质粒的提取第34-35页
            2.3 重组质粒的转化第35页
            2.4 诱导表达第35-36页
            2.5 SDS-PAGE及Western blot鉴定分析第36页
            2.6 Latcripin-13功能域蛋白的分离纯化及复性第36-38页
            2.7 目的蛋白浓度测定(Bradford法测定蛋白浓度)第38页
            2.8 圆二色光谱第38-39页
    (三)结果第39-43页
        3.1 原核表达载体构建第39-40页
        3.2 Latcripin-13功能域蛋白的诱导表达与鉴定第40-41页
        3.3 Latcripin-13功能域蛋白镍柱纯化后SDS-PAGE电泳结果第41页
        3.4 圆二色光谱第41-43页
    (四)讨论第43-44页
    (五)结论第44-45页
    (六)参考文献第45-46页
第三部分 Latcripin-13功能域的生物学活性研究第46-72页
    (一)前言第46-48页
    (二)材料和方法第48-54页
        1. 材料第48-49页
            1.1 细胞株第48页
            1.2 实验仪器第48页
            1.3 实验试剂第48-49页
        2. 实验方法第49-54页
            2.1 Latcripin-13功能域蛋白对人肺腺癌细胞A549增殖影响的检测第49页
            2.2 荧光显微镜检测Latcripin-13功能域蛋白在人肺腺癌细胞A549中的分布第49-50页
            2.3 透射电镜观察细胞亚显微结构第50页
            2.4 33258染色第50-51页
            2.5 流式细胞术检测Latcripin-13功能域蛋白对人肺癌细胞A549凋亡的影响第51页
            2.6 细胞周期检测第51-52页
            2.7 线粒体膜电位的检测第52-53页
            2.8 Western blot第53页
            2.9 Caspases活性检测第53页
            2.10 统计学方法第53-54页
    (三)结果第54-62页
        3.1 MTT法检测Latcripin-13功能域蛋白对A549增殖抑制的影响第54页
        3.2 Latcripin-13功能域蛋白在人肺腺癌A549细胞中的分布第54-55页
        3.3 透射电镜观察细胞亚显微结构第55-56页
        3.4 33258染色第56页
        3.5 目的蛋白对人肺腺癌A549细胞凋亡作用的检测第56-57页
        3.6 Latcripin-13功能域蛋白对人肺腺癌A549细胞周期影响的检测第57-58页
        3.7 线粒体膜电位的变化第58-59页
        3.8 凋亡相关蛋白检测第59-60页
        3.9 周期相关蛋白检测第60-61页
        3.10 Caspases活性检测第61-62页
    (四)讨论第62-65页
    (五)结论第65-66页
    (六)参考文献第66-72页
综述第72-107页
    参考文献第85-107页
附录第107-108页
攻读学位期间发表文章情况第108-109页
致谢第109-110页

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