中文摘要 | 第10-13页 |
英文摘要 | 第13-17页 |
第一部分 Latcripin-13基因序列的获得及蛋白结构分析 | 第18-31页 |
(一)前言 | 第18-19页 |
(二)材料和方法 | 第19-21页 |
1. 材料 | 第19-20页 |
1.1 菌株 | 第19页 |
1.2 实验仪器 | 第19页 |
1.3 实验试剂 | 第19页 |
1.4 引物 | 第19-20页 |
2. 实验方法 | 第20-21页 |
2.1 香菇C91-3 菌株总RNA提取 | 第20页 |
2.2 Latcripin-13编码序列(Coding Sequence, CDS)的获得 | 第20页 |
2.3 Latcripin-13功能域蛋白结构分析 | 第20-21页 |
(三)结果 | 第21-25页 |
3.1 Latcripin-13转录组测序产物序列验证 | 第21页 |
3.2 3′RACE反应 | 第21-22页 |
3.3 5′RACE反应 | 第22页 |
3.4 Latcripin-13编码序列(Coding Sequence, CDS)的获得 | 第22-23页 |
3.5 Latcripin-13基因序列分析 | 第23页 |
3.6 Latcripin-13蛋白结构分析 | 第23-25页 |
(四)讨论 | 第25-27页 |
(五)结论 | 第27-28页 |
(六)参考文献 | 第28-31页 |
第二部分 pET32a(+)-Latcripin-13功能域表达载体的构建及在Rosetta-gammi(DE3)中的表达 | 第31-46页 |
(一)前言 | 第31-32页 |
(二)材料和方法 | 第32-39页 |
1. 材料 | 第32-33页 |
1.1 质粒、菌株 | 第32页 |
1.2 实验仪器 | 第32-33页 |
1.3 实验试剂 | 第33页 |
2. 实验方法 | 第33-39页 |
2.1 原核表达载体构建 | 第33-34页 |
2.2 重组质粒的提取 | 第34-35页 |
2.3 重组质粒的转化 | 第35页 |
2.4 诱导表达 | 第35-36页 |
2.5 SDS-PAGE及Western blot鉴定分析 | 第36页 |
2.6 Latcripin-13功能域蛋白的分离纯化及复性 | 第36-38页 |
2.7 目的蛋白浓度测定(Bradford法测定蛋白浓度) | 第38页 |
2.8 圆二色光谱 | 第38-39页 |
(三)结果 | 第39-43页 |
3.1 原核表达载体构建 | 第39-40页 |
3.2 Latcripin-13功能域蛋白的诱导表达与鉴定 | 第40-41页 |
3.3 Latcripin-13功能域蛋白镍柱纯化后SDS-PAGE电泳结果 | 第41页 |
3.4 圆二色光谱 | 第41-43页 |
(四)讨论 | 第43-44页 |
(五)结论 | 第44-45页 |
(六)参考文献 | 第45-46页 |
第三部分 Latcripin-13功能域的生物学活性研究 | 第46-72页 |
(一)前言 | 第46-48页 |
(二)材料和方法 | 第48-54页 |
1. 材料 | 第48-49页 |
1.1 细胞株 | 第48页 |
1.2 实验仪器 | 第48页 |
1.3 实验试剂 | 第48-49页 |
2. 实验方法 | 第49-54页 |
2.1 Latcripin-13功能域蛋白对人肺腺癌细胞A549增殖影响的检测 | 第49页 |
2.2 荧光显微镜检测Latcripin-13功能域蛋白在人肺腺癌细胞A549中的分布 | 第49-50页 |
2.3 透射电镜观察细胞亚显微结构 | 第50页 |
2.4 33258染色 | 第50-51页 |
2.5 流式细胞术检测Latcripin-13功能域蛋白对人肺癌细胞A549凋亡的影响 | 第51页 |
2.6 细胞周期检测 | 第51-52页 |
2.7 线粒体膜电位的检测 | 第52-53页 |
2.8 Western blot | 第53页 |
2.9 Caspases活性检测 | 第53页 |
2.10 统计学方法 | 第53-54页 |
(三)结果 | 第54-62页 |
3.1 MTT法检测Latcripin-13功能域蛋白对A549增殖抑制的影响 | 第54页 |
3.2 Latcripin-13功能域蛋白在人肺腺癌A549细胞中的分布 | 第54-55页 |
3.3 透射电镜观察细胞亚显微结构 | 第55-56页 |
3.4 33258染色 | 第56页 |
3.5 目的蛋白对人肺腺癌A549细胞凋亡作用的检测 | 第56-57页 |
3.6 Latcripin-13功能域蛋白对人肺腺癌A549细胞周期影响的检测 | 第57-58页 |
3.7 线粒体膜电位的变化 | 第58-59页 |
3.8 凋亡相关蛋白检测 | 第59-60页 |
3.9 周期相关蛋白检测 | 第60-61页 |
3.10 Caspases活性检测 | 第61-62页 |
(四)讨论 | 第62-65页 |
(五)结论 | 第65-66页 |
(六)参考文献 | 第66-72页 |
综述 | 第72-107页 |
参考文献 | 第85-107页 |
附录 | 第107-108页 |
攻读学位期间发表文章情况 | 第108-109页 |
致谢 | 第109-110页 |