| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-17页 |
| 1.1 心肌肥厚 | 第9-12页 |
| 1.1.1 心肌肥厚的影响因素 | 第9-10页 |
| 1.1.2 心肌肥厚信号转到机制 | 第10-12页 |
| 1.2 PKC | 第12-14页 |
| 1.3 Myocardin | 第14-15页 |
| 1.4 影响Myocardin转录活性的作用机制 | 第15页 |
| 1.4.1 Myocardin的负调节因子 | 第15页 |
| 1.4.2 Myocardin的磷酸化 | 第15页 |
| 1.4.3 MicroRNAs (miRNAs)对Myocardin调节 | 第15页 |
| 1.5 本文的研究目的及意义 | 第15-16页 |
| 1.6 研究内容 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-25页 |
| 2.1.1 材料与试剂 | 第17-20页 |
| 2.1.2 常用溶液的配置 | 第20-23页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-41页 |
| 2.2.1 PKCα表达质粒的构建 | 第25-29页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第29-30页 |
| 2.2.3 细胞转染 | 第30-31页 |
| 2.2.4 RT-PCR检测 | 第31-34页 |
| 2.2.5 蛋白质免疫印记(Western blot) | 第34-35页 |
| 2.2.6 大鼠心肌细胞分离、提取 | 第35页 |
| 2.2.7 免疫荧光技术 | 第35-36页 |
| 2.2.8 形态学分析 | 第36页 |
| 2.2.9 荧光素酶活性检测(Luciferase reporter assay) | 第36-38页 |
| 2.2.10 Myocardin磷酸化的检测 | 第38-39页 |
| 2.2.11 蛋白质免疫共沉淀 | 第39-40页 |
| 2.2.12 统计分析方法 | 第40-41页 |
| 3 结果与讨论 | 第41-62页 |
| 3.1 PKCα诱导心肌肥厚 | 第41-44页 |
| 3.1.1 重组质粒pCMV-tag2B/PKCα的构建 | 第41-42页 |
| 3.1.2 PKCα在H9c2细胞中的表达 | 第42-44页 |
| 3.1.3 PKCα过表达对心肌肥厚标志基因ANF、BNP表达的影响 | 第44页 |
| 3.2 PKCα促进Myocardin的表达 | 第44-46页 |
| 3.2.1 PKCα促进了Myocardin的表达 | 第44-45页 |
| 3.2.2 激活的PKCα明显诱导的Myocardin的表达 | 第45-46页 |
| 3.3 PKCα对Myocardin转录活性的影响 | 第46-49页 |
| 3.3.1 PKCα对Myocardin转录激活ANF启动子的影响 | 第46-48页 |
| 3.3.2 PKCα对Myocardin转录激活4×CArG启动子的影响 | 第48-49页 |
| 3.4 PKCα对Myocardin诱导的心肌肥厚的影响 | 第49-53页 |
| 3.4.1 新生大鼠心肌细胞的提取及培养 | 第49-50页 |
| 3.4.2 PKCα抑制Myocardin诱导的心肌细胞表面积的增加 | 第50-51页 |
| 3.4.3 PKCα抑制Myocardin诱导的心肌肥厚标志基因ANF、BNP的表达 | 第51-53页 |
| 3.5 Calphostin C抑制了PKCα对Myocardin的抑制作用 | 第53-57页 |
| 3.5.1 抑制PKCα对Myocardin诱导心肌细胞表面积的影响 | 第53-54页 |
| 3.5.2 抑制PKCα对Myocardin诱导ANF、BNP表达的影响 | 第54-56页 |
| 3.5.3 抑制PKCα对Myocardin转录活性的影响 | 第56-57页 |
| 3.6 PKCα诱导Myocardin发生磷酸化 | 第57-61页 |
| 3.6.1 PKCα的核转位 | 第57-58页 |
| 3.6.2 U0126抑制ERK1/2的磷酸化 | 第58页 |
| 3.6.3 PMA诱导Myocardin发生磷酸化 | 第58-59页 |
| 3.6.4 PKCα诱导Myocardin发生磷酸化 | 第59-60页 |
| 3.6.5 PKCα和Myocardin相互作用 | 第60-61页 |
| 3.7 PKCα诱导Myocardin发生蛋白降解 | 第61-62页 |
| 4 结论 | 第62-63页 |
| 5 展望 | 第63-64页 |
| 6 参考文献 | 第64-71页 |
| 7 攻读硕士期间发表论文情况 | 第71-72页 |
| 8 致谢 | 第72页 |
