| 缩写表 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-27页 |
| 第一节 流感病毒 | 第14-19页 |
| 1、流感病毒的简介 | 第14页 |
| 2、流感病毒的生命周期 | 第14-19页 |
| 2.1、病毒吸附并内吞进入宿主细胞 | 第15-16页 |
| 2.2、病毒基因组的转录和复制过程 | 第16-17页 |
| 2.3、病毒的组装、成熟与释放 | 第17-19页 |
| 第二节 天然免疫 | 第19-22页 |
| 1、天然免疫应答的概述 | 第19页 |
| 2、模式识别受体(PRRs) | 第19-20页 |
| 3、抗病毒天然免疫信号转导 | 第20-21页 |
| 4、干扰素信号通路及效应蛋白 | 第21-22页 |
| 第三节 长链非编码RNAs | 第22-24页 |
| 1、长链非编码RNAs(long non-coding RNA,lnCRNAs)概述 | 第22-23页 |
| 2、lncRNAs的作用机制 | 第23-24页 |
| 第四节 本课题研究的目的和意义 | 第24-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-38页 |
| 第一节 实验材料 | 第27-28页 |
| 1、细胞株 | 第27页 |
| 2、质粒和菌株 | 第27页 |
| 3、shRNA的靶序列 | 第27页 |
| 4、主要试剂 | 第27-28页 |
| 5、主要仪器 | 第28页 |
| 第二节 实验方法 | 第28-38页 |
| 1、细胞培养 | 第28-29页 |
| 1.1、细胞复苏 | 第28-29页 |
| 1.2、细胞传代 | 第29页 |
| 1.3、细胞冻存 | 第29页 |
| 2、病毒感染细胞 | 第29页 |
| 3、细胞RNA的提取 | 第29-30页 |
| 4、反转录 | 第30-31页 |
| 5、反转录PCR(RT PCR) | 第31页 |
| 6、质粒的构建 | 第31-34页 |
| 6.1、目的片段扩增 | 第31-32页 |
| 6.2、PCR产物的电泳及胶回收纯化目的基因片段 | 第32页 |
| 6.3、载体和目的片段的酶切处理 | 第32-33页 |
| 6.4、连接反应 | 第33页 |
| 6.5、制备感受态菌体 | 第33-34页 |
| 6.6、转化 | 第34页 |
| 7、细胞转染 | 第34-35页 |
| 8、逆转录病毒包装及感染 | 第35-36页 |
| 8.1、制备病毒颗粒 | 第35页 |
| 8.2、感染细胞和细胞分选建立稳定细胞系 | 第35-36页 |
| 9、病毒滴度测定空斑实验 | 第36页 |
| 10、免疫印迹(Western blot) | 第36-38页 |
| 第三章 结果与分析 | 第38-52页 |
| 第一节 宿主长链非编码RNA的初筛 | 第38-41页 |
| 1、芯片筛选及验证 | 第38-39页 |
| 2、长链非编码RNAs的功能性初筛 | 第39-40页 |
| 3、长链非编码RNA NRAV的序列分析 | 第40-41页 |
| 第二节 病毒感染对长链非编码RNA NRAV表达水平的影响 | 第41-43页 |
| 1、流感病毒感染对长链非编码RNANRAV表达水平的影响 | 第41-43页 |
| 2、仙台病毒、呼肠孤病毒和单纯疱疹病毒感染对长链非编码RNA NRAV表达水平的影响. | 第43页 |
| 第三节 长链非编码RNA NRAV的功能验证 | 第43-45页 |
| 1、在A549细胞中过表达和干扰长链非编码RNA NRAV对流感病毒复制的影响 | 第43-45页 |
| 2、在293T细胞中过表达和干扰长链非编码RNA NRAV对流感病毒复制的影响 | 第45页 |
| 第四节 长链非编码RNA NRAV功能区的研究 | 第45-47页 |
| 1、长链非编码RNA NRAV及其截短体二级结构的预测 | 第45-46页 |
| 2、截短体的功能研究 | 第46-47页 |
| 第五节 调控长链非编码RNA NRAV表达水平的研究 | 第47-50页 |
| 1、感染病毒的细胞总RNA调控长链非编码RNA NRAV的下调 | 第47-48页 |
| 2、细胞因子不影响长链非编码RNANRAV的表达水平 | 第48-49页 |
| 3、干扰模式识别受体长链非编码RNA NRAV的表达水平不变 | 第49页 |
| 4、DAC处理对长链非编码RNA NRAV的表达水平的影响 | 第49-50页 |
| 第六节 长链非编码RNANRAV负调控干扰素刺激基因(ISGs)的表达 | 第50-52页 |
| 1、NRAV负调节关键干扰素刺激基因(ISGs)的表达 | 第50-52页 |
| 第四章 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第62页 |
