| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第14-23页 |
| 1.1 纤维素及其酶解机制 | 第14-15页 |
| 1.2 β-葡萄糖苷酶 | 第15-20页 |
| 1.2.1 β-葡萄糖苷酶的应用 | 第15-17页 |
| 1.2.2 β-葡萄糖苷酶的分类 | 第17-18页 |
| 1.2.3 β-葡萄糖苷酶的理化性质 | 第18-19页 |
| 1.2.4 β-葡萄糖苷酶的催化机制 | 第19-20页 |
| 1.3 葡萄糖耐受性研究 | 第20-22页 |
| 1.3.1 β-葡萄糖苷酶的葡萄糖耐受性 | 第20-21页 |
| 1.3.2 β-葡萄糖苷酶葡萄糖耐受性研究进展 | 第21-22页 |
| 1.4 酶的分子改造 | 第22页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二章 Alicyclobacillus sp.A4 β-葡萄糖苷酶基因的克隆表达 | 第23-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 菌株、质粒及引物 | 第23页 |
| 2.1.2 实验仪器、商业酶、试剂盒及其它生化试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 培养基及溶剂配制 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 Alicyclobacillus sp.A4基因组的提取 | 第24页 |
| 2.2.2 β-葡萄糖苷酶基因Asbg1的克隆 | 第24-26页 |
| 2.2.3 原核表达菌株Asbg1-pET30a(+)-BL21的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.4 Asbg1基因的原核表达及蛋白纯化 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-31页 |
| 2.3.1 β-葡萄糖苷酶序列的分析 | 第28-29页 |
| 2.3.2 重组表达质粒Asbg1-pET30a(+)的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.3 重组 β-葡萄糖苷酶AsBG1的异源表达及纯化 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31页 |
| 本章小结 | 第31-32页 |
| 第三章 GH1家族 β-葡萄糖苷酶AsBG1性质的测定 | 第32-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 研究对象 | 第32页 |
| 3.1.2 实验仪器、商业酶、试剂盒及其它生化试剂 | 第32页 |
| 3.1.3 培养基及溶剂配制 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-35页 |
| 3.2.1 不同底物时的酶活测定方法 | 第33页 |
| 3.2.2 标准曲线的绘制 | 第33-34页 |
| 3.2.3 AsBG1的最适反应条件 | 第34页 |
| 3.2.4 不同金属离子及化学试剂对酶活的影响 | 第34-35页 |
| 3.2.5 AsBG1底物特异性和动力学参数的测定 | 第35页 |
| 3.2.6 AsBG1的单糖耐受性 | 第35页 |
| 3.3 实验结果 | 第35-41页 |
| 3.3.1 标准曲线的绘制 | 第35-37页 |
| 3.3.2 β-葡萄糖苷酶AsBG1的最适反应条件 | 第37-38页 |
| 3.3.3 金属离子及化学试剂对AsBG1酶活性的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.4 底物特异性及动力学参数 | 第39-40页 |
| 3.3.5 AsBG1的单糖耐受性 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-42页 |
| 本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 葡萄糖耐受性分子改造及降解大豆异黄酮应用 | 第43-56页 |
| 4.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.1 菌株、质粒及引物 | 第43页 |
| 4.1.2 实验仪器、商业酶、试剂盒及其它生化试剂 | 第43页 |
| 4.1.3 培养基及溶剂配制 | 第43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-46页 |
| 4.2.1 AsBG1的耐受性测定 | 第43页 |
| 4.2.2 同源模建 | 第43-44页 |
| 4.2.3 分子对接及结构分析 | 第44页 |
| 4.2.4 多序列比对 | 第44页 |
| 4.2.5 突变体的构建、表达及蛋白纯化 | 第44-46页 |
| 4.2.6 AsBG1及其突变体葡萄糖耐受性及酶学性质测定 | 第46页 |
| 4.3 实验结果 | 第46-54页 |
| 4.3.1 AsBG1的耐受性测定 | 第46-47页 |
| 4.3.2 同源建模 | 第47-49页 |
| 4.3.3 分子对接及结构分析 | 第49-50页 |
| 4.3.4 多序列比对 | 第50-51页 |
| 4.3.5 突变体的构建、表达及蛋白纯化 | 第51页 |
| 4.3.6 AsBG1突变体的性质测定 | 第51-52页 |
| 4.3.7 H315饱和突变体的性质测定 | 第52-53页 |
| 4.3.8 突变体水解大豆苷时的葡萄糖耐受性 | 第53-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-55页 |
| 本章小结 | 第55-56页 |
| 第五章 全文结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简历 | 第64页 |
