摘要 | 第6-7页 |
abstract | 第7页 |
英文缩略表 | 第10-11页 |
第一章 引言 | 第11-21页 |
1.1 猪繁殖与呼吸障碍综合征 | 第11-14页 |
1.1.1 PRRSV病毒粒子及基因组结构 | 第11-12页 |
1.1.2 PRRSV感染性 | 第12-13页 |
1.1.3 PRRSV病毒粒子中和性抗原表位 | 第13-14页 |
1.2 免疫应答 | 第14-15页 |
1.2.1 PRRSV感染后引起的先天性免疫应答 | 第14页 |
1.2.2 抗体应答 | 第14-15页 |
1.2.3 细胞介导免疫应答 | 第15页 |
1.3 基因工程抗体制备 | 第15-21页 |
1.3.1 免疫动物制备单抗 | 第16-17页 |
1.3.2 噬菌体展示技术 | 第17页 |
1.3.3 核糖体展示技术 | 第17页 |
1.3.4 单个B细胞制备抗体技术 | 第17-21页 |
第二章 猪源重组抗体(PrAb)可变区序列的扩增及序列分析 | 第21-29页 |
2.1 材料 | 第21页 |
2.1.1 菌株和质粒 | 第21页 |
2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
2.1.3 疫苗 | 第21页 |
2.1.4 实验动物 | 第21页 |
2.1.5 主要仪器 | 第21页 |
2.2 方法 | 第21-26页 |
2.2.1 免疫实验动物并分离外周血淋巴细胞 | 第21-22页 |
2.2.2 靶B淋巴细胞分选 | 第22-23页 |
2.2.3 猪源抗体重、轻链可变区编码基因扩增 | 第23-25页 |
2.2.4 VL、VH扩增产物连接质粒鉴定 | 第25-26页 |
2.3 结果 | 第26-28页 |
2.3.1 免疫猪血清抗体检测 | 第26页 |
2.3.2 靶B细胞的分选 | 第26-27页 |
2.3.3 抗体VH和VL基因的扩增及序列分析 | 第27-28页 |
2.4 讨论 | 第28-29页 |
第三章 猪源重组抗体(PRAB)原核表达载体的构建、蛋白表达及活性鉴定 | 第29-37页 |
3.1 材料 | 第29页 |
3.1.1 质粒和菌株 | 第29页 |
3.1.2 细胞与毒株 | 第29页 |
3.1.3 主要试剂 | 第29页 |
3.1.4 主要仪器 | 第29页 |
3.2 方法 | 第29-34页 |
3.2.1 引物设计 | 第29-30页 |
3.2.2 PCR扩增 | 第30-31页 |
3.2.3 表达质粒pET-H-linker-L的构建 | 第31-32页 |
3.2.4 PrAb的原核表达及鉴定 | 第32-34页 |
3.2.5 PrAb反应活性鉴定 | 第34页 |
3.3 结果 | 第34-36页 |
3.3.1 H-Linker-L全长基因的扩增及重组质粒构建 | 第34-35页 |
3.3.2 PrAb的表达、纯化及鉴定 | 第35页 |
3.3.3 PrAb反应活性鉴定 | 第35-36页 |
3.4 讨论 | 第36-37页 |
第四章 全文结论 | 第37-38页 |
参考文献 | 第38-47页 |
附录 | 第47-48页 |
致谢 | 第48-49页 |
作者简历 | 第49页 |