| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 酿酒酵母木糖乙醇代谢途径的辅因子工程研究 | 第12-39页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第12-13页 |
| 1.1 前言 | 第13-19页 |
| 1.1.1 利用木质纤维素生产燃料乙醇的意义 | 第13页 |
| 1.1.2 木质纤维素的利用 | 第13页 |
| 1.1.3 酿酒酵母木糖代谢途径 | 第13-15页 |
| 1.1.3.1 XR-XDH途径 | 第14-15页 |
| 1.1.3.2 XI途径 | 第15页 |
| 1.1.4 酿酒酵母辅因子工程 | 第15-17页 |
| 1.1.5 NADH氧化酶 | 第17-18页 |
| 1.1.6 实验室前期工作及本课题研究内容 | 第18-19页 |
| 1.2 材料与方法 | 第19-29页 |
| 1.2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 1.2.1.1 菌株和质粒 | 第19-20页 |
| 1.2.1.2 引物及DNA序列测定 | 第20页 |
| 1.2.1.3 分子克隆工具酶与试剂 | 第20-21页 |
| 1.2.1.4 仪器 | 第21页 |
| 1.2.1.5 培养基 | 第21页 |
| 1.2.2 实验方法 | 第21-29页 |
| 1.2.2.1 培养条件 | 第21-22页 |
| 1.2.2.2 细胞质量的测定 | 第22页 |
| 1.2.2.3 细胞外代谢产物分析 | 第22页 |
| 1.2.2.4 代谢参数的计算 | 第22-23页 |
| 1.2.2.5 大肠杆菌转化 | 第23页 |
| 1.2.2.6 大肠杆菌质粒提取 | 第23页 |
| 1.2.2.7 酿酒酵母转化 | 第23-24页 |
| 1.2.2.8 酿酒酵母染色体提取 | 第24页 |
| 1.2.2.9 酵母总RNA的提取、反转录实及时定量PCR(定量PCR) | 第24页 |
| 1.2.2.10 胞内NAD~+和NADH测定 | 第24-25页 |
| 1.2.2.11 NADH氧化酶酶活测定方法 | 第25页 |
| 1.2.2.12 木糖异构酶酶活测定方法 | 第25-26页 |
| 1.2.2.13 木糖还原酶,木糖醇脱氢酶酶活测定 | 第26页 |
| 1.2.2.14 Gibson连接 | 第26-27页 |
| 1.2.2.15 利用Cre-loxP系统进行KanMX筛选标记的丢失 | 第27-28页 |
| 1.2.2.16 菌株保藏 | 第28-29页 |
| 1.3 结果与讨论 | 第29-37页 |
| 1.3.1 不同noxE表达强度载体的构建 | 第29-30页 |
| 1.3.2 亮氨酸缺陷型菌株的构建 | 第30页 |
| 1.3.3 XR-XDH及XI木糖代谢重组菌株的构建 | 第30-31页 |
| 1.3.4 重组菌株noxE转录水平测定 | 第31页 |
| 1.3.5 不同noxE酶活水平测定 | 第31-32页 |
| 1.3.6 重组菌株胞内辅因子水平测定 | 第32-33页 |
| 1.3.7 noxE的表达降低XI菌株甘油的积累 | 第33-35页 |
| 1.3.8 noxE的表达降低XR-XDH菌株木糖醇和甘油的积累 | 第35-37页 |
| 1.4 本章小结 | 第37-39页 |
| 第二章 酿酒酵母3-羟基丙酸代谢途径的辅因子工程研究 | 第39-54页 |
| 缩略词表(Abbreviation) | 第39-40页 |
| 2.1 前言 | 第40-43页 |
| 2.1.1 3-羟基丙酸简介 | 第40页 |
| 2.1.2 3-羟基丙酸的生产方法 | 第40-42页 |
| 2.1.3 利用酿酒酵母生产3-羟基丙酸 | 第42页 |
| 2.1.4 本课题的研究内容 | 第42-43页 |
| 2.2 材料与方法 | 第43-46页 |
| 2.2.1 菌株及质粒 | 第43页 |
| 2.2.2 引物及DNA序列测定 | 第43-45页 |
| 2.2.3 MCR酶活测定方法 | 第45页 |
| 2.2.4 3-羟基丙酸等代谢产物的检测 | 第45-46页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第46-53页 |
| 2.3.1 酿酒酵母3-HP代谢途径的建立 | 第46-48页 |
| 2.3.1.1 丙二酰辅酶A还原酶基因(MCR)的引入 | 第46-47页 |
| 2.3.1.2 MCR酶活的测定 | 第47页 |
| 2.3.1.3 重组酿酒酵母菌株的发酵 | 第47-48页 |
| 2.3.2 酿酒酵母3-HP代谢途径的优化 | 第48-53页 |
| 2.3.2.1 ACC1启动子的替换 | 第49-50页 |
| 2.3.2.2 引入柠檬酸裂解酶基因ACL | 第50页 |
| 2.3.2.3 异源丙酮酸钾酸裂解酶基因(pflA、pflB)的引入 | 第50-52页 |
| 2.3.2.4 菌株代谢过程中辅因子水平的优化 | 第52-53页 |
| 2.4 本章小结 | 第53-54页 |
| 全文总结 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第63-64页 |
| 学位论文评阅及答辩倩况表 | 第64页 |
