| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 引言 | 第15-17页 |
| 1 文献综述 | 第17-53页 |
| 1.1 蛋白质药物简介 | 第17-21页 |
| 1.1.1 蛋白质药物的功能分类及特点 | 第17-18页 |
| 1.1.2 蛋白质药物的发展概况 | 第18-19页 |
| 1.1.3 蛋白质药物的发展趋势 | 第19-21页 |
| 1.2 蛋白质药物的聚乙二醇修饰 | 第21-32页 |
| 1.2.1 聚乙二醇的理化性质 | 第22-23页 |
| 1.2.2 聚乙二醇修饰的优势 | 第23-25页 |
| 1.2.3 聚乙二醇的修饰化学 | 第25-30页 |
| 1.2.4 聚乙二醇修饰的影响因素 | 第30-32页 |
| 1.3 蛋白质药物的白蛋白修饰 | 第32-36页 |
| 1.3.1 与白蛋白融合 | 第32-34页 |
| 1.3.2 白蛋白共价修饰 | 第34-35页 |
| 1.3.3 白蛋白非共价修饰 | 第35-36页 |
| 1.4 修饰产物的分离纯化技术 | 第36-38页 |
| 1.4.1 亲和层析 | 第36页 |
| 1.4.2 离子交换层析 | 第36-37页 |
| 1.4.3 凝胶过滤层析 | 第37页 |
| 1.4.4 疏水层析 | 第37-38页 |
| 1.5 修饰产物的常用表征方法 | 第38-41页 |
| 1.5.1 电泳法 | 第38页 |
| 1.5.2 高效液相色谱法 | 第38-39页 |
| 1.5.3 质谱法 | 第39页 |
| 1.5.4 圆二色光谱分析 | 第39页 |
| 1.5.5 荧光光谱分析 | 第39-40页 |
| 1.5.6 分析超离心分析 | 第40页 |
| 1.5.7 动态光散射分析 | 第40-41页 |
| 1.5.8 核磁分析 | 第41页 |
| 1.5.9 红外光谱分析 | 第41页 |
| 1.5.10 表面等离子共振分析 | 第41页 |
| 1.6 重组蛋白质药物的药代动力学和药效动力学 | 第41-45页 |
| 1.6.1 给药途径 | 第42页 |
| 1.6.2 给药途径和免疫原性 | 第42页 |
| 1.6.3 分布 | 第42-43页 |
| 1.6.4 消除 | 第43-45页 |
| 1.7 生长激素和生长激素拮抗剂 | 第45-51页 |
| 1.7.1 生长激素的生化特征 | 第45-46页 |
| 1.7.2 生长激素的生物学作用及应用 | 第46-48页 |
| 1.7.3 生长激素长效药物的研究进展 | 第48-49页 |
| 1.7.4 生长激素拮抗剂的构建 | 第49-50页 |
| 1.7.5 生长激素拮抗剂药物 | 第50-51页 |
| 1.8 论文的立题思想 | 第51-53页 |
| 2 不同链长聚乙二醇定点修饰生长激素拮抗剂N末端的研究 | 第53-73页 |
| 2.1 引言 | 第53-54页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第54-55页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第55页 |
| 2.3 实验方法 | 第55-60页 |
| 2.3.1 M-P20K-GHA制备条件的确定 | 第55页 |
| 2.3.2 M-P40K-GHA制备条件的确定 | 第55-56页 |
| 2.3.3 GHA修饰样品的纯化 | 第56页 |
| 2.3.4 SDS-PAGE电泳分析 | 第56-57页 |
| 2.3.5 蛋白浓度测定 | 第57-58页 |
| 2.3.6 凝胶过滤分析 | 第58页 |
| 2.3.7 PEG修饰位点的鉴定 | 第58-59页 |
| 2.3.8 圆二色分析 | 第59页 |
| 2.3.9 荧光分析 | 第59页 |
| 2.3.10 动态光散射分析 | 第59页 |
| 2.3.11 分析超离心 | 第59-60页 |
| 2.3.12 药效动力学分析 | 第60页 |
| 2.3.13 统计学分析 | 第60页 |
| 2.4. 实验结果与讨论 | 第60-72页 |
| 2.4.1 GHA修饰样品的制备及纯化 | 第60-63页 |
| 2.4.2 PEG修饰产物的特征鉴定 | 第63-67页 |
| 2.4.3 修饰产物结构鉴定 | 第67-70页 |
| 2.4.4 M-P20K-GHA和M-P40K-GHA的药效动力学评价 | 第70-72页 |
| 2.5 本章小结 | 第72-73页 |
| 3 苯胺基连接桥提升N末端聚乙二醇化生长激素药效的研究 | 第73-105页 |
| 3.1 引言 | 第73-74页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第74-75页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第74页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第74-75页 |
| 3.3 实验方法 | 第75-82页 |
| 3.3.1 重组生长激素的构建 | 第75页 |
| 3.3.2 重组生长激素的培养发酵 | 第75页 |
| 3.3.3 发酵菌体的收集与破碎 | 第75-76页 |
| 3.3.4 重组生长激素的分离纯化 | 第76页 |
| 3.3.5 SDS-PAGE分析 | 第76页 |
| 3.3.6 蛋白浓度测定 | 第76页 |
| 3.3.7 凝胶过滤分析 | 第76-77页 |
| 3.3.8 MALDI-TOF法测定hGH分子量 | 第77页 |
| 3.3.9 单修饰产物的制备及纯化 | 第77-78页 |
| 3.3.10 核磁分析鉴定产物结构 | 第78页 |
| 3.3.11 酶解肽图分析 | 第78-79页 |
| 3.3.12 动态光散射分析 | 第79页 |
| 3.3.13 圆二色分析 | 第79页 |
| 3.3.14 荧光光谱分析 | 第79-80页 |
| 3.3.15 分析超离心分析 | 第80页 |
| 3.3.16 表面等离子共振分析 | 第80页 |
| 3.3.17 抗酶解能力分析 | 第80页 |
| 3.3.18 免疫原性分析 | 第80-81页 |
| 3.3.19 药代动力学分析 | 第81页 |
| 3.3.20 药效动力学分析 | 第81页 |
| 3.3.21 统计学分析 | 第81-82页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第82-103页 |
| 3.4.1 重组生长激素的纯化与鉴定 | 第82-85页 |
| 3.4.2 聚乙二醇化重组人生长激素的制备、纯化及鉴定 | 第85-92页 |
| 3.4.3 修饰产物的结构分析 | 第92-96页 |
| 3.4.4 致密构象产物hGH-phenyl-PEG的优势 | 第96-100页 |
| 3.4.5 药代动力学分析 | 第100-101页 |
| 3.4.6 药效动力学分析 | 第101-103页 |
| 3.5 本章小结 | 第103-105页 |
| 4 聚乙二醇-十六烷定点修饰生长激素N末端的研究 | 第105-131页 |
| 4.1 引言 | 第105-106页 |
| 4.2 材料与设备 | 第106-107页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第106页 |
| 4.2.2 实验设备 | 第106-107页 |
| 4.3 实验方法 | 第107-113页 |
| 4.3.1 生长激素样品的制备和纯化 | 第107-109页 |
| 4.3.2 核磁分析鉴定修饰产物结构 | 第109页 |
| 4.3.3 红外分析鉴定修饰产物结构 | 第109页 |
| 4.3.4 SDS-PAGE电泳分析 | 第109-110页 |
| 4.3.5 尺寸排阻色谱分析 | 第110页 |
| 4.3.6 酶解肽图分析 | 第110页 |
| 4.3.7 蛋白浓度测定 | 第110页 |
| 4.3.8 动态光散射分析 | 第110页 |
| 4.3.9 圆二色分析 | 第110-111页 |
| 4.3.10 荧光分析 | 第111页 |
| 4.3.11 分析超离心 | 第111页 |
| 4.3.12 表面等离子共振分析 | 第111-112页 |
| 4.3.13 免疫原性分析 | 第112页 |
| 4.3.14 药代动力学分析 | 第112页 |
| 4.3.15 药效动力学分析 | 第112-113页 |
| 4.3.16 统计学分析 | 第113页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第113-129页 |
| 4.4.1 PEG-十六烷衍生物的结构鉴定 | 第113-115页 |
| 4.4.2 修饰样品的纯化 | 第115-116页 |
| 4.4.3 hGH修饰样品的特征分析 | 第116-122页 |
| 4.4.4 修饰产物的体外活性分析 | 第122-123页 |
| 4.4.5 免疫原性分析 | 第123-125页 |
| 4.4.6 药代动力学分析 | 第125-126页 |
| 4.4.7 药效动力学分析 | 第126-129页 |
| 4.5 本章小结 | 第129-131页 |
| 5 结论与展望 | 第131-135页 |
| 5.1 本论文研究成果 | 第131-132页 |
| 5.2 本论文创新点 | 第132页 |
| 5.3 下一步的工作建议 | 第132-135页 |
| 参考文献 | 第135-147页 |
| 附录A 图目录 | 第147-151页 |
| 附录B 表格目录 | 第151-153页 |
| 符号表 | 第153-155页 |
| 个人简历及发表文章目录 | 第155-157页 |
| 致谢 | 第157页 |
