| 摘要 | 第2-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 符号说明 | 第12-14页 |
| 第一章、重组禽疱疹病毒疫苗载体研究进展 | 第14-31页 |
| 一、禽疱疹病毒的生物学特性 | 第14-15页 |
| 二、重组禽疮疹疫苗的研究进展 | 第15-20页 |
| 2.1 重组禽流感-禽疱疹病毒载体疫苗 | 第16-17页 |
| 2.2 重组传染性法囊-禽疱疹病毒载体疫苗 | 第17-19页 |
| 2.3 重组新城疫-禽疱疹病毒载体疫苗 | 第19页 |
| 2.4 其他重组禽疱疹病毒载体疫苗 | 第19-20页 |
| 三、影响重组疫苗效果的关键因素 | 第20-24页 |
| 3.1 重组疫苗载体的选择 | 第21-22页 |
| 3.2 插入位点的选择 | 第22-23页 |
| 3.3 启动子的选择 | 第23-24页 |
| 3.4 插入外源基因表达蛋白的属性 | 第24页 |
| 四、总结 | 第24-26页 |
| 参考文献 | 第26-31页 |
| 第二章、重组疫苗中间转移质粒的构建与鉴定 | 第31-46页 |
| 一、材料与仪器 | 第32-34页 |
| 1.1 病毒、质粒、细胞和菌株 | 第32-33页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第33-34页 |
| 1.3 主要的分子生物学软件 | 第34页 |
| 二、方法 | 第34-39页 |
| 2.1 密码子优化与合成 | 第34页 |
| 2.2 HVT内源性gB启动子分析与克隆 | 第34-35页 |
| 2.3 中间转移质粒的构建 | 第35-38页 |
| 2.4 启动子活性比较分析 | 第38页 |
| 2.5 中间质粒鉴定 | 第38-39页 |
| 2.6 蛋白质免疫印迹 | 第39页 |
| 三、试验结果 | 第39-44页 |
| 3.1 密码子优化的OHA | 第39-40页 |
| 3.2 HVTgB启动子预测分析与克隆 | 第40页 |
| 3.3 中间质粒构建结果 | 第40-42页 |
| 3.4 荧光定量PCR结果 | 第42页 |
| 3.5 中间质粒的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.6 蛋白质免疫印迹 | 第43-44页 |
| 四、讨论 | 第44-46页 |
| 第三章、重组疫苗的构建与鉴定及免疫效力测定 | 第46-73页 |
| 一、材料 | 第48-49页 |
| 1.1 毒株、质粒与细胞 | 第48-49页 |
| 1.2 主要试剂与仪器 | 第49页 |
| 1.3 主要的分子生物学软件 | 第49页 |
| 二、方法 | 第49-58页 |
| 2.1 同源重组 | 第49-51页 |
| 2.1.1 中间质粒的制备 | 第50页 |
| 2.1.2 rHVT-GFP基因组的制备 | 第50页 |
| 2.1.3 磷酸钙共转染 | 第50-51页 |
| 2.1.4 重组毒株的筛选和纯化 | 第51页 |
| 2.2 CRISPR介导的同源重组 | 第51-54页 |
| 2.2.1 CMV-DsRed的构建 | 第51页 |
| 2.2.2 Guide RNA的设计 | 第51-52页 |
| 2.2.3 双guide RNA cas9质粒的构建 | 第52-53页 |
| 2.2.4 CRISPR介导同源重组 | 第53-54页 |
| 2.3 重组毒株的间接免疫荧光(IFA)鉴定 | 第54页 |
| 2.4 重组毒株PCR鉴定与测序 | 第54页 |
| 2.5 重组毒株的蛋白免疫印迹试验 | 第54-55页 |
| 2.6 生长曲线测定 | 第55-56页 |
| 2.7 抗原定位 | 第56页 |
| 2.8 遗传稳定性试验 | 第56页 |
| 2.9 动物试验免疫方案 | 第56-57页 |
| 2.10 抗体水平检测 | 第57页 |
| 2.11 SPF鸡攻毒保护试验 | 第57-58页 |
| 三、结果 | 第58-64页 |
| 3.1 同源重组结果 | 第58页 |
| 3.2 CRISPR介导的同源重组 | 第58-60页 |
| 3.3 重组毒株的间接免疫荧光 | 第60页 |
| 3.4 重组毒PCR鉴定与测序结果 | 第60页 |
| 3.5 蛋白质免疫印迹 | 第60-61页 |
| 3.6 生长曲线 | 第61-62页 |
| 3.7 抗原定位 | 第62页 |
| 3.8 遗传稳定性 | 第62-63页 |
| 3.9 抗体水平监测 | 第63页 |
| 3.10 攻毒保护率 | 第63-64页 |
| 四、讨论 | 第64-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 全文小结及创新点 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读硕士期间发表学术论文和专利申请 | 第75-76页 |