| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-30页 |
| 1 NMD机制及其研究进展 | 第13-23页 |
| 1.1 NMD通路及其关键因子 | 第13-17页 |
| 1.2 NMD角色认知的发展变化 | 第17-18页 |
| 1.3 NMD机制与翻译机制密切相关 | 第18-19页 |
| 1.4 NMD在应激、免疫和病毒复制中的调节作用 | 第19-23页 |
| 2 真核翻译起始因子eIF4G1的功能及其研究进展 | 第23-25页 |
| 2.1 eIF4G1的功能 | 第23-24页 |
| 2.2 eIF4G1与细胞应激 | 第24-25页 |
| 2.3 eIF4G1与疾病 | 第25页 |
| 3 自噬及其研究进展 | 第25-28页 |
| 3.1 自噬概述 | 第25-26页 |
| 3.2 自噬的发生过程 | 第26-28页 |
| 3.3 自噬与转录因子 | 第28页 |
| 4 研究的目的与意义 | 第28-30页 |
| 第二章 材料方法 | 第30-53页 |
| 1 试验材料 | 第30-35页 |
| 1.1 试验样品 | 第30页 |
| 1.1.1 细胞样品 | 第30页 |
| 1.1.2 菌株与载体 | 第30页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 1.3 主要试剂及药品 | 第31-33页 |
| 1.3.1 试验所用试剂（盒） | 第31-32页 |
| 1.3.2 细胞培养试验试剂 | 第32页 |
| 1.3.3 Western bolt主要试剂 | 第32-33页 |
| 1.4 常用试剂的配制 | 第33-35页 |
| 1.4.1 转化所用溶液的配制 | 第33-34页 |
| 1.4.2 细胞培养所用试剂 | 第34页 |
| 1.4.3 WB试验所用试剂 | 第34-35页 |
| 1.5 主要应用到的生物信息学网站和分析软件 | 第35页 |
| 2 试验方法 | 第35-53页 |
| 2.1 NMD底物基因水平检测 | 第35-40页 |
| 2.1.1 LC3- EGFP-Hela/Hela细胞的复苏与培养 | 第35-36页 |
| 2.1.2 LC3- EGFP-Hela细胞的饥饿处理 | 第36页 |
| 2.1.3 LC3- EGFP-Hela细胞的恢复营养处理 | 第36页 |
| 2.1.4 细胞总RNA的提取及质量检测 | 第36-38页 |
| 2.1.5 cDNA的制备 | 第38页 |
| 2.1.6 cDNA的检测 | 第38-39页 |
| 2.1.7 NMD底物基因定量引物设计 | 第39-40页 |
| 2.1.8 Q-PCR定量分析NMD底物基因mRNA水平 | 第40页 |
| 2.2 pCI-TPI-PTC-4H报告载体检测NMD水平 | 第40-45页 |
| 2.2.1 pCI-TPI载体穿刺菌的复苏和扩增 | 第40-42页 |
| 2.2.2 pCI-TPI载体的鉴定 | 第42-45页 |
| 2.2.3 细胞的转染 | 第45页 |
| 2.3 应激相关因子检测 | 第45-46页 |
| 2.4 自噬相关蛋白检测 | 第46-49页 |
| 2.4.1 细胞总蛋白的提取及浓度测定 | 第46-47页 |
| 2.4.2 Western blot检测自噬水平 | 第47-49页 |
| 2.5 自噬标记蛋白LC3荧光检测 | 第49-50页 |
| 2.5.1 细胞爬片的制备 | 第49页 |
| 2.5.2 细胞爬片的固定及观察拍照 | 第49-50页 |
| 2.6 干涉试验 | 第50-51页 |
| 2.6.1 干涉片段的选择 | 第50页 |
| 2.6.2 干涉片段与报告载体共转染 | 第50-51页 |
| 2.6.3 相关基因的检测 | 第51页 |
| 2.7 双标免疫荧光试验 | 第51-53页 |
| 2.7.1 细胞爬片双标免疫荧光实验步骤 | 第51-52页 |
| 2.7.2 激光共聚焦拍照 | 第52-53页 |
| 第三章 结果分析 | 第53-65页 |
| 1 营养饥饿应激激活自噬、抑制NMD | 第53-57页 |
| 1.1 营养饥饿应激激活自噬 | 第53-54页 |
| 1.2 营养饥饿应激抑制NMD效率 | 第54-55页 |
| 1.3 消除营养饥饿应激后NMD活性恢复 | 第55-56页 |
| 1.4 雷帕霉素抑制NMD活性 | 第56-57页 |
| 2 营养饥饿应激状态下eIF4G1表达下调 | 第57-59页 |
| 2.1 营养饥饿应激对NMD关键因子及应激相关因子mRNA水平的影响 | 第57-58页 |
| 2.2 营养饥饿应激抑制eIF4G1的表达 | 第58-59页 |
| 3 干涉eIF4G1激活自噬、抑制NMD | 第59-62页 |
| 3.1 eIF4G1干涉片段转染效率的检测 | 第59-60页 |
| 3.2 干涉eIF4G1能够抑制NMD活性 | 第60-61页 |
| 3.3 干涉eIF4G1能够激活自噬 | 第61-62页 |
| 4 营养饥饿应激诱导的自噬降解eIF4G1蛋白 | 第62-65页 |
| 4.1 营养饥饿应激状态下eIF4G1蛋白移位于自噬体 | 第62-63页 |
| 4.2 自噬降解eIF4G1蛋白 | 第63-65页 |
| 第四章 讨论 | 第65-70页 |
| 1 营养饥饿应激对自噬和NMD的影响 | 第65-66页 |
| 2 eIF4G1对自噬和NMD的调控作用 | 第66-67页 |
| 3 营养饥饿应激状态下自噬与NMD的相互作用 | 第67-70页 |
| 小结 | 第70-72页 |
| 1 本研究的主要结果 | 第70-71页 |
| 2 本研究的创新之处 | 第71页 |
| 3 本研究的不足及下一步试验计划 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-84页 |
| 附录 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
