| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| ·锌指核酸酶的结构 | 第13-18页 |
| ·锌指蛋白-新 DNA 结合结构域的设计平台 | 第14-18页 |
| ·FokⅠ催化结构域 | 第18页 |
| ·ZFN 介导的基因修饰 | 第18-24页 |
| ·基因干扰 | 第19-20页 |
| ·同源重组介导的基因组修饰 | 第20-23页 |
| ·基因修饰的特异性 | 第23-24页 |
| ·ZFN 在疾病治疗中的应用 | 第24-25页 |
| ·ZFN 在疾病治疗中的应用案例 | 第24页 |
| ·脱靶效应存在的风险性 | 第24-25页 |
| ·CFTR 基因研究进展 | 第25-28页 |
| ·CFTR 结构及功能 | 第26页 |
| ·囊性纤维化( cystic fibrosis，CF)治疗现状 | 第26-28页 |
| 第二章 靶向猪 CFTR 基因的锌指蛋白的筛选 | 第28-41页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·质粒与菌种 | 第28页 |
| ·试剂及工具酶 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-35页 |
| ·CFTR 基因潜在 ZFN 靶位点的选择 | 第29页 |
| ·三个随机三锌指库的构建 | 第29-32页 |
| ·含有猪 CFTR 基因部分靶位点的报告载体的构建 | 第32-33页 |
| ·第一轮细菌双杂交筛选有效锌指蛋白库及单个有效锌指的扩增及组装 | 第33-34页 |
| ·细菌双杂交筛选有效结合 CFTR 基因单侧靶位点的三锌指蛋白 | 第34页 |
| ·含有猪 CFTR 基因靶位点的报告载体的构建 | 第34-35页 |
| ·高效特异结合单侧靶序列的锌指蛋白的筛选 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-38页 |
| ·CFTR 基因潜在 ZFN 靶位点的选择 | 第35-36页 |
| ·随机三锌指蛋白库的构建 | 第36-37页 |
| ·第一轮细菌双杂交筛选有效锌指蛋白库及单个有效锌指的扩增及组装 | 第37页 |
| ·细菌双杂交筛选有效结合 CFTR 基因单侧靶位点的三锌指蛋白 | 第37页 |
| ·第二轮细菌双杂交筛选高效特异结合单侧靶序列的 ZFP | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·结论 | 第39-41页 |
| 第三章 锌指核酸酶活性的酵母细胞验证 | 第41-46页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·质粒与菌种 | 第41页 |
| ·试剂及工具酶 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-43页 |
| ·报告载体 pAC-Gal4-VP16-ZFBS 的构建 | 第41-42页 |
| ·识别 CFTR 基因靶位点的锌指核酸酶表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·锌指核酸酶酶活性在酵母水平的检测 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-44页 |
| ·锌指核酸酶酶活性在酵母水平的检测 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·结论 | 第45-46页 |
| 第四章 总结及展望 | 第46-48页 |
| ·结论 | 第46页 |
| ·本研究的创新点 | 第46-47页 |
| ·还需深入的问题 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-56页 |
| 附录 | 第56-61页 |
| 附录 1 仪器名称型号生产厂家或地址 | 第56-57页 |
| 附录 2 主要试剂的配制方法 | 第57-59页 |
| 附录 3 部分实验方法 | 第59-61页 |
| 缩略词 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简介 | 第63页 |
