| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 种质资源保存 | 第12-15页 |
| 1.1.1 种质资源保存的方法 | 第12-13页 |
| 1.1.2 卵母细胞冷冻保存现状 | 第13-14页 |
| 1.1.3 卵母细胞冷冻保存困难 | 第14-15页 |
| 1.2 细胞凋亡 | 第15-21页 |
| 1.2.1 死亡受体途径 | 第16页 |
| 1.2.2 线粒体途径 | 第16-17页 |
| 1.2.3 哺乳动物卵母细胞凋亡的研究现状 | 第17-19页 |
| 1.2.4 冷冻对哺乳动物卵母细胞凋亡的影响 | 第19页 |
| 1.2.5 凋亡抑制剂在细胞凋亡中的应用 | 第19-21页 |
| 第二章 特异性凋亡抑制剂在冷冻猪卵母细胞凋亡途径中的应用 | 第21-38页 |
| 2.1 材料 | 第21-26页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第21-23页 |
| 2.1.2 设备与耗材 | 第23-24页 |
| 2.1.3 试剂的配制 | 第24-26页 |
| 2.3 方法 | 第26-29页 |
| 2.3.1 采集和体外成熟培养 | 第26页 |
| 2.3.2 玻璃化冷冻和解冻 | 第26页 |
| 2.3.3 早期凋亡的测定 | 第26-27页 |
| 2.3.4 caspase水平的测定 | 第27页 |
| 2.3.5 线粒体膜电位的测定 | 第27页 |
| 2.3.6 总RNA提取 | 第27页 |
| 2.3.7 反转录 | 第27-28页 |
| 2.3.8 荧光定量PCR（ qRT- PCR） | 第28页 |
| 2.3.9 猪卵母细胞冻后存活率的测定 | 第28-29页 |
| 2.3.10 冷冻猪卵母细胞体外发育能力的测定 | 第29页 |
| 2.3.11 数据统计 | 第29页 |
| 2.4 结果与分析 | 第29-35页 |
| 2.4.1 凋亡抑制剂对玻璃化冷冻猪卵母细胞早期凋亡的影响 | 第29-30页 |
| 2.4.2 凋亡抑制剂对玻璃化冷冻猪卵母细胞中caspase活性的影响 | 第30-32页 |
| 2.4.3 凋亡抑制剂对玻璃化冷冻猪卵母细胞线粒体膜电位的影响 | 第32-33页 |
| 2.4.4 凋亡抑制剂对玻璃化冷冻猪卵母细胞中凋亡基因表达的影响 | 第33-34页 |
| 2.4.5 凋亡抑制剂对玻璃化冷冻猪卵母细胞存活率和孤雌激活发育能力的影响 | 第34-35页 |
| 2.5 讨论 | 第35-37页 |
| 2.6 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 凋亡抑制剂Z-VAD-FMK在猪卵母细胞冷冻保存中的应用 | 第38-48页 |
| 3.1 材料 | 第38页 |
| 3.1.1 仪器 | 第38页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 3.1.3 试剂配制 | 第38页 |
| 3.2 方法 | 第38-40页 |
| 3.2.1 采集和体外成熟培养 | 第38-39页 |
| 3.2.2 玻璃化冷冻和解冻 | 第39页 |
| 3.2.3 早期凋亡检测 | 第39页 |
| 3.2.4 caspase活性的检测 | 第39页 |
| 3.2.5 线粒体膜电位检测 | 第39页 |
| 3.2.6 总RNA提取 | 第39页 |
| 3.2.7 反转录 | 第39页 |
| 3.2.8 qRT- PCR | 第39-40页 |
| 3.2.9 冻后存活率的测定 | 第40页 |
| 3.2.10 孤雌发育能力的测定 | 第40页 |
| 3.2.11 数据统计 | 第40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-45页 |
| 3.3.1 Z-VAD-FMK对猪冷冻卵母细胞早期凋亡率的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.2 Z-VAD-FMK对冷冻猪MII期卵母细胞内caspase活性的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.3 Z-VAD-FMK处理对猪冷冻卵母细胞线粒体膜电位的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.4 Z-VAD-FMK对猪冷冻卵母细胞凋亡相关基因表达的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.5 冻后Z-VAD-FMK对猪冷冻卵母细胞存活率和体外发育能力的影响 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-46页 |
| 3.5 小结 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-57页 |
| 附录 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 成果 | 第60页 |
