缩略语表 | 第6-7页 |
中文摘要 | 第7-11页 |
英文摘要 | 第11-13页 |
前言 | 第14-15页 |
文献回顾 | 第15-32页 |
第一部分 骨髓间充质干细胞对小鼠脓毒症后心功能障碍的治疗作用 | 第32-52页 |
1 材料 | 第32-35页 |
1.1 实验动物 | 第32-33页 |
1.2 主要试剂和材料 | 第33-34页 |
1.3 主要仪器 | 第34-35页 |
2 实验方法 | 第35-41页 |
2.1 BMSCs的原代分离、培养、鉴定 | 第35-37页 |
2.2 成纤维细胞的分离、培养 | 第37页 |
2.3 脓毒症小鼠模型的建立及实验分组 | 第37-38页 |
2.4 左室收缩及舒张功能测定 | 第38-39页 |
2.5 体内BMSCsFluc+e GFP+的BLI多模态成像 | 第39页 |
2.6 酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清心肌损伤指标及炎症因子水平 | 第39页 |
2.7 苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠各脏器组织病理变化 | 第39-40页 |
2.8 透射电子显微镜检测心肌超微结构的变化 | 第40页 |
2.9 蛋白测量 | 第40-41页 |
2.10 统计学分析 | 第41页 |
3 结果 | 第41-49页 |
3.1 BMSCs的生物学特征 | 第41-43页 |
3.2 小鼠LPS诱导的脓毒症模型细胞治疗后的一般状况 | 第43页 |
3.3 BMSCs可减轻脓毒症导致的重要脏器炎症损伤,减轻全身炎症反应水平 | 第43-45页 |
3.4 脓毒血症导致小鼠左室功能恶化,BMSCs治疗可显著改善心功能 | 第45-47页 |
3.5 小动物活体成像技术追踪腹腔内移植BMSCsFluc+e GFP+的存活和转归 | 第47页 |
3.6 透射电镜观察研究各组心肌的超微结构变化 | 第47-48页 |
3.7 BMSCs辅助治疗提高脓毒症小鼠生存率 | 第48页 |
3.8 LPS诱导的脓毒症小鼠心肌组织内m TORC1-p70S6K被活化 | 第48-49页 |
4 讨论 | 第49-51页 |
5 小结 | 第51-52页 |
第二部分 心肌m TORC1-S6K信号通路在骨髓间充质干细胞治疗LPS所致小鼠脓毒症心功能障碍中的作用 | 第52-76页 |
1 材料 | 第52-53页 |
1.1 实验动物 | 第52页 |
1.2 实验动物使用: | 第52-53页 |
1.3 腺病毒载体构建 | 第53页 |
2 方法 | 第53-64页 |
2.1 实验分组及流程 | 第53-54页 |
2.2 腺病毒载体包装及滴度测定 | 第54-59页 |
2.3 心肌特异性RAPTOR敲除鼠的制备与鉴定 | 第59-62页 |
2.4 腺病毒点注射心肌构建RAPTOR过表达小鼠 | 第62-63页 |
2.5 制备LPS诱导的脓毒症模型并进行细胞治疗 | 第63页 |
2.6 左室收缩及舒张功能测定 | 第63页 |
2.7 小动物活体成像技术追踪腹腔内移植BMSCsFluc+e GFP+的存活和转归 | 第63页 |
2.8 酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清心肌损伤指标及炎症因子水平 | 第63页 |
2.9 观察各组小鼠生存率 | 第63-64页 |
2.10 心肌组织凋亡TUNEL染色 | 第64页 |
2.11 蛋白含量检测 | 第64页 |
3 结果 | 第64-72页 |
3.1 转基因小鼠心肌内RAPTOR蛋白表达的测定 | 第64-65页 |
3.2 心肌特异性RAPTOR敲除可减轻脓毒血症导致小鼠心脏左室功能恶化,联合BMSCs治疗可更显著改善心功能,提高存活率 | 第65-67页 |
3.3 小动物活体生物发光成像(BLI)示踪腹腔内移植BMSCs~(Fluc+eGFP+)的存活和转归 | 第67-68页 |
3.4 Elisa法测定各组心肌组织炎症因子水平 | 第68-71页 |
3.5 心肌特异性RAPTOR基因敲lisa法测定各组心肌组织炎症因子水平除联合BMSCs治疗可显著减少心肌细胞的凋亡 | 第71-72页 |
4 讨论 | 第72-74页 |
5 小结 | 第74-76页 |
第三部分 骨髓间充质干细胞治疗脓毒症心功能障碍的机制研究 | 第76-86页 |
1 材料与方法 | 第76-79页 |
1.1 细胞系 | 第76页 |
1.2 si RNA合成 | 第76-77页 |
1.3 腺病毒合成 | 第77页 |
1.4 cytomix的制备 | 第77页 |
1.5 实验流程及分组 | 第77-79页 |
1.6 siRNA及病毒转染方法 | 第79页 |
2 结果 | 第79-83页 |
2.1 炎症因子刺激可活化m TOR信号通路,BMSCs治疗可影响其活化水平 | 第79-82页 |
2.2 mTOR信号通路与TLR4-NF-κB信号通路在BMSCs治疗过程中的“互调” | 第82-83页 |
3 讨论 | 第83-85页 |
4 小结 | 第85-86页 |
参考文献 | 第86-99页 |
个人简历和研究成果 | 第99-101页 |
致谢 | 第101-102页 |