| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-8页 |
| 试剂列表 | 第8-10页 |
| 仪器列表 | 第10-13页 |
| 1 引言 | 第13-22页 |
| 1.1 PRRS的病原学 | 第13-16页 |
| 1.1.1 PRRSV的一般特性 | 第13-14页 |
| 1.1.2 PRRSV的基因组特点 | 第14-16页 |
| 1.2 PRRSV基因组遗传变异特点 | 第16-17页 |
| 1.3 PRRSV流行病学与发病机制 | 第17-18页 |
| 1.3.1 PRRSV的流行病学 | 第17-18页 |
| 1.3.2 PRRSV的发病机制 | 第18页 |
| 1.4 PRRS诊断方法的研究进展 | 第18-21页 |
| 1.4.1 临床诊断 | 第18-19页 |
| 1.4.2 病毒分离 | 第19页 |
| 1.4.3 血清学技术 | 第19-20页 |
| 1.4.4 分子生物学技术 | 第20-21页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 2 PRRSV河北分离株ORF5 与NSP2 基因遗传变异分析 | 第22-32页 |
| 摘要 | 第22页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 病料 | 第22页 |
| 2.1.2 细胞 | 第22页 |
| 2.1.3 细胞培养用溶液 | 第22-23页 |
| 2.1.4 RNA提取用溶液及琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-26页 |
| 2.2.1 病料处理 | 第23页 |
| 2.2.2 病毒分离培养 | 第23-24页 |
| 2.2.3 病毒基因组总RNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.4 RT-PCR引物设计合成 | 第24页 |
| 2.2.5 反转录合成cDNA及病毒的PCR鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.6 ORF5 和NSP2 基因的扩增和测序 | 第25-26页 |
| 2.2.7 ORF5 和NSP2 基因序列的比对分析 | 第26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-30页 |
| 2.3.1 病毒分离鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.2 ORF5 和NSP2 基因的PCR扩增 | 第27页 |
| 2.3.3 ORF5 基因同源性及遗传进化树分析 | 第27-28页 |
| 2.3.4 NSP2 基因同源性分析 | 第28-30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-32页 |
| 3 PRRSV HB-XL株ORF7 基因的原核表达 | 第32-42页 |
| 摘要 | 第32页 |
| 3.1 材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 质粒、感受态与限制性内切酶 | 第32页 |
| 3.1.2 RNA提取用溶液及琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第32页 |
| 3.1.3 目的基因转化用试剂 | 第32页 |
| 3.1.4 SDS-PAGE试剂 | 第32-33页 |
| 3.2 方法 | 第33-37页 |
| 3.2.1 病毒基因组总RNA的提取 | 第33页 |
| 3.2.2 PRRSV ORF7 基因的RT-PCR扩增 | 第33-34页 |
| 3.2.3 PCR产物的回收纯化 | 第34页 |
| 3.2.4 原核表达载体pET-32a-N的构建 | 第34-35页 |
| 3.2.5 重组质粒转化 | 第35页 |
| 3.2.6 重组质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2.7 重组表达菌株的诱导表达及条件优化 | 第36-37页 |
| 3.2.8 SDS-PAGE分析 | 第37页 |
| 3.2.9 重组蛋白的可溶性检测 | 第37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-41页 |
| 3.3.1 N基因的PCR扩增 | 第37页 |
| 3.3.2 阳性重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3.3 pET-32a-N表达载体N基因测序鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3.4 重组蛋白优化条件下的表达 | 第39-40页 |
| 3.3.5 重组蛋白的可溶性检测 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-42页 |
| 4 PRRSV HB-XL株N蛋白的表达、纯化及间接ELISA检测方法的初步建立 | 第42-55页 |
| 摘要 | 第42页 |
| 4.1 材料 | 第42-43页 |
| 4.1.1 质粒 | 第42页 |
| 4.1.2 血清及抗体 | 第42页 |
| 4.1.3 试剂盒 | 第42页 |
| 4.1.4 SDS-PAGE用溶液 | 第42-43页 |
| 4.1.5 Western blot用溶液 | 第43页 |
| 4.1.6 间接ELISA用溶液 | 第43页 |
| 4.2 方法 | 第43-47页 |
| 4.2.1 重组蛋白的表达及纯化 | 第43-44页 |
| 4.2.2 纯化的N蛋白浓度测定 | 第44页 |
| 4.2.3 重组N蛋白的Western blot鉴定 | 第44-45页 |
| 4.2.4 PRRSV N-ELISA检测方法的初步建立 | 第45-46页 |
| 4.2.5 PRRSV N-ELISA检测方法的特异性试验 | 第46页 |
| 4.2.6 PRRSV N-ELISA的重复性试验 | 第46-47页 |
| 4.2.7 与商业化试剂盒对比 | 第47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-54页 |
| 4.3.1 重组N蛋白的纯化 | 第47页 |
| 4.3.2 重组N蛋白的Western blot鉴定 | 第47-48页 |
| 4.3.3 PRRSV N-ELISA检测方法工作条件的确定 | 第48-51页 |
| 4.3.4 PRRSV N-ELISA检测方法的特异性试验结果 | 第51-52页 |
| 4.3.5 PRRSV N-ELISA检测方法的重复性试验结果 | 第52-53页 |
| 4.3.6 与商业化试剂盒检测结果对比 | 第53-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
