| 中文摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 前言 | 第17-19页 |
| 第一部分 理论研究 | 第19-24页 |
| 1 结肠癌的中医认识 | 第19-20页 |
| 1.1 病因病机 | 第19页 |
| 1.2 辨证论治 | 第19-20页 |
| 2 中医与免疫 | 第20-21页 |
| 2.1 中医对免疫的认识 | 第20-21页 |
| 2.2 中医药的免疫调节作用 | 第21页 |
| 3 益气化瘀解毒方的来源及组成 | 第21-22页 |
| 4 结肠癌转移的研究概况 | 第22-24页 |
| 4.1 各种假说模型 | 第22-23页 |
| 4.2 肿瘤转移的步骤 | 第23-24页 |
| 第二部分 实验研究 | 第24-86页 |
| 实验一: 复方成分的HPLC分析 | 第24-28页 |
| 1 实验材料 | 第24-25页 |
| 1.1 中药复方 | 第24页 |
| 1.2 标准品试剂 | 第24-25页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第25页 |
| 2 方法与步骤 | 第25-26页 |
| 2.1 复方煎煮方法 | 第25页 |
| 2.2 色谱条件 | 第25-26页 |
| 3 实验结果 | 第26-27页 |
| 3.1 中药复方的煎煮结果 | 第26页 |
| 3.2 色谱结果 | 第26-27页 |
| 4 讨论 | 第27-28页 |
| 实验二: 结肠癌细胞株中肿瘤干细胞标志的分析 | 第28-31页 |
| 1 实验材料 | 第28-29页 |
| 1.1 实验细胞株 | 第28页 |
| 1.2 主要试剂耗材 | 第28-29页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第29页 |
| 2 方法与步骤 | 第29页 |
| 2.1 细胞培养 | 第29页 |
| 2.2 流式检细胞表面干细胞标志 | 第29页 |
| 3 实验结果 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30-31页 |
| 实验三: 结肠癌肿瘤干细胞的鉴定 | 第31-43页 |
| 1 实验材料 | 第31-32页 |
| 1.1 实验细胞株和动物 | 第31页 |
| 1.2 主要试剂耗材 | 第31-32页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第32页 |
| 2 方法与步骤 | 第32-34页 |
| 2.1 细胞分选 | 第32页 |
| 2.2 Real-time PCR实验 | 第32-33页 |
| 2.3 细胞周期实验 | 第33-34页 |
| 2.4 无血清培养实验 | 第34页 |
| 2.5 软琼脂培养实验 | 第34页 |
| 2.6 恢复血清培养实验 | 第34页 |
| 2.7 裸鼠成瘤实验 | 第34页 |
| 3 实验结果 | 第34-41页 |
| 3.1 细胞分选结果 | 第34-35页 |
| 3.2 Real-time PCR实验结果 | 第35-36页 |
| 3.3 细胞周期实验结果 | 第36-37页 |
| 3.4 无血清培养实验结果 | 第37-38页 |
| 3.5 软琼脂培养实验结果 | 第38页 |
| 3.6 恢复血清培养实验结果 | 第38-39页 |
| 3.7 裸鼠皮下移植瘤实验结果 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 实验四: 益气化疲解毒方对结肠癌干细胞的影响 | 第43-49页 |
| 1 实验材料 | 第43-44页 |
| 1.1 实验细胞株和动物 | 第43页 |
| 1.2 主要试剂耗材 | 第43-44页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第44页 |
| 2 方法与步骤 | 第44-45页 |
| 2.1 中药复方配制 | 第44页 |
| 2.2 体外实验 | 第44-45页 |
| 2.3 体内实验 | 第45页 |
| 3 实验结果 | 第45-48页 |
| 3.1 体外实验 | 第45-47页 |
| 3.2 体内实验 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 实验五: 益气化瘀解毒方对裸鼠皮下移植瘤的影响 | 第49-53页 |
| 1 实验材料 | 第49-50页 |
| 1.1 实验细胞株和动物 | 第49页 |
| 1.2 主要试剂耗材 | 第49页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第49-50页 |
| 2 方法与步骤 | 第50页 |
| 3 实验结果 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 实验六: 益气化瘀解毒方对结肠癌原位移植瘤的影响 | 第53-58页 |
| 1 实验材料 | 第53-54页 |
| 1.1 实验细胞株和动物 | 第53页 |
| 1.2 主要试剂耗材 | 第53页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第53-54页 |
| 2 方法与步骤 | 第54-55页 |
| 2.1 原位移植瘤实验步骤 | 第54-55页 |
| 2.2 分组与给药 | 第55页 |
| 3 实验结果 | 第55-56页 |
| 3.1 益气化瘀解毒方对结肠癌原位移植瘤的种植转移的影响 | 第55-56页 |
| 3.2 益气化瘀解毒方对结肠癌原位移植瘤的种植转移的统计结果 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 实验七: 益气化瘀解毒方对结肠癌脾脏移植瘤肝转移的影响 | 第58-64页 |
| 1 实验材料 | 第58-59页 |
| 1.1 实验细胞株和实验动物 | 第58页 |
| 1.2 主要试剂耗材 | 第58页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第58-59页 |
| 2 方法与步骤 | 第59-60页 |
| 3 实验结果 | 第60-63页 |
| 3.1 一般情况 | 第60页 |
| 3.2 各组小鼠的体重改变情况 | 第60页 |
| 3.3 中药复方对脾脏造模的裸鼠存活率的影响 | 第60-61页 |
| 3.4 中药复方对脾脏造模的裸鼠的结肠癌肝转移的影响 | 第61-63页 |
| 4 讨论 | 第63-64页 |
| 实验八: 益气化瘀解毒方对裸鼠免疫细胞的影响 | 第64-76页 |
| 1 实验材料 | 第64-65页 |
| 1.1 实验细胞株和实验动物 | 第64页 |
| 1.2 主要试剂耗材 | 第64页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第64-65页 |
| 2 方法与步骤 | 第65-66页 |
| 2.1 动物造模实验 | 第65页 |
| 2.2 外周血和脾脏细胞流式实验 | 第65-66页 |
| 3 实验结果 | 第66-73页 |
| 3.1 益气化瘀解毒方对外周血和脾脏的NK细胞活化率的影响 | 第66-69页 |
| 3.2 益气化瘀解毒方对外周血和脾脏的巨噬细胞含量的影响 | 第69-71页 |
| 3.3 益气化瘀解毒方对外周血和脾脏的中性粒细胞含量的影响 | 第71-73页 |
| 3.4 益气化瘀解毒方作用效果的汇总表 | 第73页 |
| 4 讨论 | 第73-76页 |
| 实验九: 益气化瘀解毒方对造模裸鼠血浆细胞因子的影响 | 第76-81页 |
| 1 实验材料 | 第76页 |
| 1.1 实验细胞株和实验动物 | 第76页 |
| 1.2 主要试剂耗材 | 第76页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第76页 |
| 2 实验步骤 | 第76-77页 |
| 2.1 样品的准备 | 第76-77页 |
| 2.2 玻片芯片的准备 | 第77页 |
| 2.3 芯片操作流程 | 第77页 |
| 3 实验结果 | 第77-80页 |
| 3.1 荧光图像结果 | 第77-78页 |
| 3.2 荧光数值比较 | 第78-80页 |
| 4 讨论 | 第80-81页 |
| 实验十: 益气化瘀解毒方及其拆方对裸鼠巨噬细胞的影响 | 第81-86页 |
| 1 实验材料 | 第81-82页 |
| 1.1 实验中药和动物 | 第81页 |
| 1.2 主要试剂耗材 | 第81页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第81-82页 |
| 2 方法与步骤 | 第82页 |
| 2.1 动物实验 | 第82页 |
| 2.2 外周血及脾脏的流式细胞术实验 | 第82页 |
| 3 实验结果 | 第82-84页 |
| 3.1 一般情况 | 第82-83页 |
| 3.2 各组裸鼠的体重改变情况 | 第83页 |
| 3.3 中药复方对脾指数的影响 | 第83页 |
| 3.4 中药复方对裸鼠巨噬细胞含量的影响 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-86页 |
| 第三部分 总结及展望 | 第86-88页 |
| 1 课题结论 | 第86页 |
| 2 创新点 | 第86-87页 |
| 2.1 基于体内实验的整体效果评价,多角度探索机制 | 第86页 |
| 2.2 基于机体免疫细胞研究固有免疫对于结肠癌肝转移的影响 | 第86页 |
| 2.3 深化了对中药"益气"功能的理解 | 第86-87页 |
| 3 不足与展望 | 第87-88页 |
| 3.1 未探索益气化瘀解毒方的时效、量效与抑制结肠癌肝转移的疗效之间的关系 | 第87页 |
| 3.2 未探索益气化瘀解毒方原方和拆方的差别的机制 | 第87页 |
| 3.3 本课题只局限于一株人的结肠癌细胞株进行了研究 | 第87-88页 |
| 第四部分 结语 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-95页 |
| 附录 | 第95-96页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第96-98页 |
| 攻读博士学位期间参与的主要科研项目 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 个人简历 | 第100页 |
