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RNF2抑制肝癌细胞的恶性生物学行为及其与MANF相互作用的研究

英文缩略词表(Abbreviation)第7-9页
中文摘要第9-14页
英文摘要第14-17页
1 前言第18-20页
2 实验材料第20-25页
    2.1 实验标本的制备第20页
        2.1.1 实验标本的收集第20页
        2.1.2 肝脏组织的包埋和切片第20页
    2.2 细胞株第20页
    2.3 质粒第20-21页
    2.4 抗体第21页
    2.5 引物及siRNA第21-22页
    2.6 主要试剂第22页
    2.7 主要试剂配制方法第22-24页
    2.8 实验仪器第24-25页
3 试验方法第25-35页
    3.1 免疫组织化学第25-26页
    3.2 石蜡切片免疫荧光第26-27页
    3.3 细胞免疫荧光第27页
    3.4 细胞的培养以及瞬时转染第27-28页
    3.5 RT-PCR第28-29页
        3.5.1 细胞RNA的提取第28页
        3.5.2 RT反应第28-29页
        3.5.3 PCR扩增第29页
    3.6 免疫印迹第29-30页
        3.6.1 蛋白样品的制备第29页
        3.6.2 SDS-PAGE凝胶的制备第29-30页
        3.6.3 上样电泳第30页
        3.6.4 转膜第30页
        3.6.5 封闭,抗体孵育及蛋白检测第30页
    3.7 MTT实验第30-31页
    3.8 Transwell侵袭实验第31页
        3.8.1 Matrigel胶的制备第31页
        3.8.2 实验的处理第31页
    3.9 细胞划痕实验第31-32页
    3.10 软克隆琼脂克隆形成实验第32页
    3.11 组织免疫共沉淀第32页
    3.12 质粒的小量提取第32-33页
    3.13 质粒的中量提取第33-35页
4 实验结果第35-53页
    4.1 RNF2在HCC中的表达第35-37页
    4.2 RNF2对HCC细胞活力的影响第37-38页
    4.3 RNF2促进HCC细胞的死亡第38-40页
    4.4 RNF2对HCC细胞凋亡的影响第40-41页
    4.5 RNF2对HCC细胞侵袭能力的影响第41-43页
    4.6 RNF2对HCC细胞迁移能力的影响第43-44页
    4.7 RNF2对单个细胞增殖能力的影响第44-46页
    4.8 RNF2和MANF在HCC中的相互作用第46-48页
        4.8.1 OGD或TM的刺激下RNF2和MANF在细胞核中共定位第46-47页
        4.8.2 RNF2和MANF在肝癌组织中存在共定位第47页
        4.8.3 免疫共沉淀证实RNF2和MANF在肝癌组织中相互作用第47-48页
    4.9 RNF2对HCC细胞中MANF的mRNA表达水平没有影响第48-50页
    4.10 RNF2在HCC细胞中对MANF蛋白水平的影响第50-51页
    4.11 MANF的蛋白水平对RNF2存在剂量依赖第51-52页
    4.12 RNF2上调OGD及TM刺激下MANF的蛋白水平第52-53页
5 讨论第53-55页
6 结论第55页
7 创新点第55-56页
8 参考文献第56-63页
附录第63-65页
致谢第65-66页
综述第66-83页
    参考文献第74-83页

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