英文缩略词表(Abbreviation) | 第7-9页 |
中文摘要 | 第9-14页 |
英文摘要 | 第14-17页 |
1 前言 | 第18-20页 |
2 实验材料 | 第20-25页 |
2.1 实验标本的制备 | 第20页 |
2.1.1 实验标本的收集 | 第20页 |
2.1.2 肝脏组织的包埋和切片 | 第20页 |
2.2 细胞株 | 第20页 |
2.3 质粒 | 第20-21页 |
2.4 抗体 | 第21页 |
2.5 引物及siRNA | 第21-22页 |
2.6 主要试剂 | 第22页 |
2.7 主要试剂配制方法 | 第22-24页 |
2.8 实验仪器 | 第24-25页 |
3 试验方法 | 第25-35页 |
3.1 免疫组织化学 | 第25-26页 |
3.2 石蜡切片免疫荧光 | 第26-27页 |
3.3 细胞免疫荧光 | 第27页 |
3.4 细胞的培养以及瞬时转染 | 第27-28页 |
3.5 RT-PCR | 第28-29页 |
3.5.1 细胞RNA的提取 | 第28页 |
3.5.2 RT反应 | 第28-29页 |
3.5.3 PCR扩增 | 第29页 |
3.6 免疫印迹 | 第29-30页 |
3.6.1 蛋白样品的制备 | 第29页 |
3.6.2 SDS-PAGE凝胶的制备 | 第29-30页 |
3.6.3 上样电泳 | 第30页 |
3.6.4 转膜 | 第30页 |
3.6.5 封闭,抗体孵育及蛋白检测 | 第30页 |
3.7 MTT实验 | 第30-31页 |
3.8 Transwell侵袭实验 | 第31页 |
3.8.1 Matrigel胶的制备 | 第31页 |
3.8.2 实验的处理 | 第31页 |
3.9 细胞划痕实验 | 第31-32页 |
3.10 软克隆琼脂克隆形成实验 | 第32页 |
3.11 组织免疫共沉淀 | 第32页 |
3.12 质粒的小量提取 | 第32-33页 |
3.13 质粒的中量提取 | 第33-35页 |
4 实验结果 | 第35-53页 |
4.1 RNF2在HCC中的表达 | 第35-37页 |
4.2 RNF2对HCC细胞活力的影响 | 第37-38页 |
4.3 RNF2促进HCC细胞的死亡 | 第38-40页 |
4.4 RNF2对HCC细胞凋亡的影响 | 第40-41页 |
4.5 RNF2对HCC细胞侵袭能力的影响 | 第41-43页 |
4.6 RNF2对HCC细胞迁移能力的影响 | 第43-44页 |
4.7 RNF2对单个细胞增殖能力的影响 | 第44-46页 |
4.8 RNF2和MANF在HCC中的相互作用 | 第46-48页 |
4.8.1 OGD或TM的刺激下RNF2和MANF在细胞核中共定位 | 第46-47页 |
4.8.2 RNF2和MANF在肝癌组织中存在共定位 | 第47页 |
4.8.3 免疫共沉淀证实RNF2和MANF在肝癌组织中相互作用 | 第47-48页 |
4.9 RNF2对HCC细胞中MANF的mRNA表达水平没有影响 | 第48-50页 |
4.10 RNF2在HCC细胞中对MANF蛋白水平的影响 | 第50-51页 |
4.11 MANF的蛋白水平对RNF2存在剂量依赖 | 第51-52页 |
4.12 RNF2上调OGD及TM刺激下MANF的蛋白水平 | 第52-53页 |
5 讨论 | 第53-55页 |
6 结论 | 第55页 |
7 创新点 | 第55-56页 |
8 参考文献 | 第56-63页 |
附录 | 第63-65页 |
致谢 | 第65-66页 |
综述 | 第66-83页 |
参考文献 | 第74-83页 |