| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第1章 综述 | 第13-23页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 转录调控因子的基本特征 | 第13-15页 |
| 1.2.1 转录因子的分类 | 第13-14页 |
| 1.2.2 转录因子的结合位点 | 第14页 |
| 1.2.3 转录调控区 | 第14页 |
| 1.2.4 转录调控因子的结构形式 | 第14-15页 |
| 1.3 GntR家族转录调控因子的特征 | 第15-20页 |
| 1.3.1 GntR家族转录调控因子的研究现状 | 第15页 |
| 1.3.2 Rv0494蛋白作为转录因子可能调控的基因 | 第15-20页 |
| 1.4 研究转录因子调控功能的实验方法 | 第20-22页 |
| 1.4.1 CHIP-Seq方法 | 第20-21页 |
| 1.4.2 凝胶迁移或电泳迁移率检测 | 第21页 |
| 1.4.3 DNaseI法 | 第21页 |
| 1.4.4 点突变技术 | 第21页 |
| 1.4.5 报告基因分析 | 第21-22页 |
| 1.5 转录调控因子研究意义 | 第22-23页 |
| 第2章 引言 | 第23-25页 |
| 第3章 材料与方法 | 第25-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-29页 |
| 3.1.1 化学试剂 | 第25页 |
| 3.1.2 实验菌株、质粒载体和引物 | 第25页 |
| 3.1.3 培养基和主要试剂 | 第25-26页 |
| 3.1.4 实验所需试剂 | 第26-28页 |
| 3.1.5 主要实验仪器 | 第28-29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-42页 |
| 3.2.1 结核分枝杆菌Rv0494基因的体外扩增 | 第29-30页 |
| 3.2.2 PCR扩增产物的回收 | 第30页 |
| 3.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第30-31页 |
| 3.2.4 Rv0494基因的TA克隆 | 第31-32页 |
| 3.2.5 重组质粒的提取 | 第32页 |
| 3.2.6 Rv0494重组质粒的构建 | 第32-34页 |
| 3.2.7 Rv0494重组蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第34-35页 |
| 3.2.8 Rv0494重组耻垢分枝杆菌的构建 | 第35-37页 |
| 3.2.9 启动子活性检测 | 第37-38页 |
| 3.2.10 Rv0494蛋白的转录调控功能分析 | 第38页 |
| 3.2.11 Rv0494转录调控因子的结构形式 | 第38-39页 |
| 3.2.12 菌落形态观察 | 第39页 |
| 3.2.13 耻垢分枝杆菌生物膜培养方法 | 第39页 |
| 3.2.14 耻垢分枝杆菌滑动实验 | 第39页 |
| 3.2.15 Rv0494对重组耻垢分枝杆菌生长的影响 | 第39页 |
| 3.2.16 微孔培养板倍比稀释法测定MIC | 第39-40页 |
| 3.2.17 Rv0494对重组耻垢分枝杆菌在饥饿、氧化压力环境下的影响 | 第40页 |
| 3.2.18 双层琼脂法测Rv0494对重组耻垢分枝杆菌抵抗过氧化氢的影响 | 第40-41页 |
| 3.2.19 双层琼脂法测Rv0494对重组耻垢分枝杆菌抵抗SDS的影响 | 第41页 |
| 3.2.20 脂肪酸GC-MS样品提取 | 第41-42页 |
| 3.3 数据处理与统计分析 | 第42-43页 |
| 第4章 结果与分析 | 第43-59页 |
| 4.1 从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增Rv0494目的基因 | 第43页 |
| 4.2 构建BL21-pET28-Rv0494重组大肠杆菌 | 第43-44页 |
| 4.3 Rv0494重组蛋白在BL21大肠杆菌中的表达纯化 | 第44-45页 |
| 4.4 构建pNIT(myc)-Rv0494重组耻垢分枝杆菌 | 第45-47页 |
| 4.5 Rv0494重组蛋白在耻垢分枝杆菌中成功表达 | 第47页 |
| 4.6 Rv0494启动子活性分析 | 第47-48页 |
| 4.7 EMSA检测Rv0494蛋白与自身启动子的相互作用 | 第48-49页 |
| 4.8 Rv0494调控因子在体外以单体的结构形式存在 | 第49-50页 |
| 4.9 Rv0494对重组耻垢分枝杆菌的菌落形态无明显影响 | 第50-51页 |
| 4.10 Rv0494对重组耻垢分枝杆菌生物膜形成无明显影响 | 第51页 |
| 4.11 Rv0494对重组耻垢分枝杆菌的滑动能力无明显影响 | 第51-52页 |
| 4.12 Rv0494对重组耻垢分枝杆菌的生长速率无明显影响 | 第52-53页 |
| 4.13 Rv0494对重组耻垢分枝杆菌对各种抗生素的MIC无明显差异 | 第53页 |
| 4.14 Rv0494对重组耻垢分枝杆菌在饥饿条件下的存活无明显影响 | 第53-54页 |
| 4.15 Rv0494减弱重组耻垢分枝杆菌对氧化剂联氨的耐受 | 第54页 |
| 4.16 Rv0494减弱重组耻垢分枝杆菌对过氧化氢(H_2O_2)的耐受 | 第54-56页 |
| 4.17 Rv0494减弱重组耻垢分枝杆菌对SDS压力环境的耐受 | 第56-57页 |
| 4.18 脂肪酸GC-MS分析 | 第57-59页 |
| 第5章 结论与展望 | 第59-61页 |
| 5.1 实验结论 | 第59页 |
| 5.2 讨论与展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
| 硕士期间发表及撰写的文章 | 第67页 |
