| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 英文缩写词 | 第10-19页 |
| 第1章 绪论 | 第19-33页 |
| 1.1 干细胞衰老与微环境研究现状 | 第19-24页 |
| 1.1.1 干细胞衰老 | 第19-21页 |
| 1.1.2 干细胞微环境 | 第21-24页 |
| 1.2 间充质干细胞衰老的研究现状 | 第24-28页 |
| 1.2.1 间充质干细胞定义，来源、免疫表型和分化 | 第24-25页 |
| 1.2.2 间充质干细胞衰老的特征 | 第25-26页 |
| 1.2.3 间充质干细胞衰老的分子机制 | 第26-27页 |
| 1.2.4 间充质干细胞衰老与老化性疾病的关系 | 第27-28页 |
| 1.3 LKB-1与干细胞 | 第28-30页 |
| 1.3.1 LKB-1蛋白结构与功能 | 第28-29页 |
| 1.3.2 LKB-1调控干细胞能量代谢和细胞周期 | 第29-30页 |
| 1.3.3 LKB-1与调控细胞衰老相关性研究 | 第30页 |
| 1.4 本课题的研究意义和研究内容 | 第30-33页 |
| 第2章 人脐带、胎盘、骨髓、脂肪源MSCs和胎盘源HSC获取和培养 | 第33-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-36页 |
| 2.2 实验仪器 | 第36页 |
| 2.3 试验方法 | 第36-40页 |
| 2.3.1 人脐带间充质干细胞(UC-MSC)的分离培养 | 第36-37页 |
| 2.3.2 人胎盘源间充质干细胞（PD-MSCs）分离制备 | 第37页 |
| 2.3.3 人骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）分离培养 | 第37-38页 |
| 2.3.4 人脂肪间充质干细胞(AD-MSC)的分离培养 | 第38页 |
| 2.3.5 人胎盘HSC的提取 | 第38页 |
| 2.3.6 人脐血HSC的提取 | 第38-39页 |
| 2.3.7 MSCs表面抗原和生长曲线的测定 | 第39页 |
| 2.3.8 MSCs的诱导分化实验 | 第39页 |
| 2.3.9 胎盘HSC集落培养 | 第39-40页 |
| 2.4 实验结果 | 第40-48页 |
| 2.4.1 MSCs形态学特性 | 第40-42页 |
| 2.4.2 MSCs的细胞免疫表型 | 第42-44页 |
| 2.4.3 MSCs增殖能力检测 | 第44页 |
| 2.4.4 MSCs成脂、成骨和成软骨分化 | 第44-46页 |
| 2.4.5 脐血与胎盘HSC比较 | 第46-47页 |
| 2.4.6 HSC体外集落培养结果 | 第47-48页 |
| 2.5 讨论 | 第48-50页 |
| 2.6 本章小结 | 第50-51页 |
| 第3章 不同微环境对间充质干细胞衰老影响 | 第51-79页 |
| 3.1 实验材料与溶液配制 | 第51-54页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 3.1.2 主要溶液配制 | 第52-54页 |
| 3.2 实验仪器 | 第54页 |
| 3.3 试验方法 | 第54-60页 |
| 3.3.1 检测不同血清微环境对MSCs增殖、分化、凋亡和端粒的变化 | 第54-60页 |
| 3.3.2 检测不同PH对MSCs增殖、分化、衰老的影响 | 第60页 |
| 3.3.3 检测渗透压对MSCs增殖、分化、衰老的改变 | 第60页 |
| 3.4 实验结果 | 第60-76页 |
| 3.4.1 FBS和CS长期培养UC-MSCs的CPD计算与细胞计数 | 第60-62页 |
| 3.4.2 FBS和CS长期培养UC-MSCs的增殖能力的比较 | 第62-64页 |
| 3.4.3 FBS和CS长期培养UC-MSCs的凋亡蛋白的测定 | 第64-65页 |
| 3.4.4 FBS和CS长期培养UC-MSCs的分化比较 | 第65-66页 |
| 3.4.5 FBS和CS长期培养UC-MSCs的 β-半乳糖苷酶染色结果 | 第66-68页 |
| 3.4.6 FBS和CS长期培养UC-MSCs的衰老相关基因的变化 | 第68-69页 |
| 3.4.7 FBS和CS长期培养UC-MSCs的端粒长度的变化 | 第69页 |
| 3.4.8 不同PH对UC-MSCs、增殖、分化、衰老的影响 | 第69-72页 |
| 3.4.9 不同渗透压微环境对AD-MSC形态、增殖、分化、衰老的影响 | 第72-76页 |
| 3.5 讨论 | 第76-78页 |
| 3.6 本章小结 | 第78-79页 |
| 第4章 间充质干细胞衰老模型的建立 | 第79-91页 |
| 4.1 实验材料与溶液配制 | 第79-80页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第79页 |
| 4.1.2 溶液配制 | 第79-80页 |
| 4.2 主要仪器 | 第80页 |
| 4.3 试验方法 | 第80-82页 |
| 4.3.1 自然传代法获得衰老MSCs | 第80页 |
| 4.3.2 高糖、阿霉素、H2O2诱导MSCs衰老 | 第80页 |
| 4.3.3 姬姆萨染色法观察MSCs形态 | 第80-81页 |
| 4.3.4 MSCs增值曲线的测定 | 第81页 |
| 4.3.5 衰老特异的 β-半乳糖苷酶染色 | 第81页 |
| 4.3.6 不同生理状态的MSCs分化实验 | 第81页 |
| 4.3.7 RT-PCR测定衰老相关基因表达和细胞周期的检测 | 第81-82页 |
| 4.4 实验结果 | 第82-87页 |
| 4.4.1 高糖、阿霉素和过氧化氢诱导后MSCs形态变化 | 第82页 |
| 4.4.2 MTT法检测阿霉素、高糖和过氧化氢不同剂量对MSCs增殖影响 | 第82-83页 |
| 4.4.3 应用 β-半乳糖苷酶染色观察三种诱导剂制备MSCs衰老模型的差异 | 第83-84页 |
| 4.4.4 比较三种诱导剂制备的衰老UC-MSCs分化功能的差异 | 第84-86页 |
| 4.4.5 RT-PCR测定衰老相关基因表达和细胞周期的检测 | 第86-87页 |
| 4.4.6 复制性MSCs衰老与过氧化氢诱导MSC衰老模型比较 | 第87页 |
| 4.5 讨论 | 第87-89页 |
| 4.6 本章小结 | 第89-91页 |
| 第5章 LKB-1 对间充质干细胞衰老调控机制研究 | 第91-105页 |
| 5.1 实验材料 | 第91页 |
| 5.2 实验仪器 | 第91-92页 |
| 5.3 试验方法 | 第92-95页 |
| 5.3.1 MSCs的分离与鉴定 | 第92页 |
| 5.3.2 检测间充质干细胞的LKB-1mRNA表达情况 | 第92页 |
| 5.3.3 siRNA干扰LKB-1表达检测 | 第92-93页 |
| 5.3.4 细胞增殖检测 | 第93页 |
| 5.3.5 Brdu检测细胞增殖 | 第93页 |
| 5.3.6 活性氧的测定 | 第93-94页 |
| 5.3.7 Q-PCR检测基因LKB-1、AMPK、p16、p21、p53 mRNA表达检测 | 第94页 |
| 5.3.8 Western blotting检测 | 第94页 |
| 5.3.9 统计学分析 | 第94-95页 |
| 5.4 实验结果 | 第95-102页 |
| 5.4.1 微环境变化促使MSCs衰老伴随LKB-1,AMPK表达增强 | 第95-96页 |
| 5.4.2.明确衰老MSCs中LKB-1与衰老相关基因的表达调控作用 | 第96-97页 |
| 5.4.3 LKB干涉后 β 半乳糖染色和ROS的测定 | 第97-98页 |
| 5.4.4 LKB干涉后brdu测定细胞增殖能力的改变 | 第98-99页 |
| 5.4.5 LKB-1干涉后衰老调控蛋白测定 | 第99-100页 |
| 5.4.6 年轻、衰老MSCs组和干涉LKB-1组中LKB-1和AMPK磷酸化水平 | 第100-101页 |
| 5.4.7 年轻、衰老MSCs和干涉LKB-1衰老MSCs中p LKB-1、p GSK3和 β-catenin表达情况 | 第101-102页 |
| 5.5 讨论 | 第102-104页 |
| 5.6 本章小结 | 第104-105页 |
| 结论 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-119页 |
| 攻读博士学位期间所发表的学术论文 | 第119-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
