| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 前言 | 第7-12页 |
| 1.1 青光眼发病机制研究进展 | 第7-8页 |
| 1.2 LIM同源盒和Lmx1b | 第8-10页 |
| 1.3 青光眼和Lmx1b的联系 | 第10页 |
| 1.4 第二代测序技术 | 第10-11页 |
| 1.4.1 DNA测序技术进展 | 第10-11页 |
| 1.4.2 转录组学和二代测序在转录组学的应用 | 第11页 |
| 1.5 立项依据和意义 | 第11-12页 |
| 第二章 材料与方法 | 第12-16页 |
| 2.1 材料的采集 | 第12页 |
| 2.2 pEGFP-Lmx1b表达载体的构建 | 第12-13页 |
| 2.2.1 高丰度Lmx1b组织的获得和RNA提取 | 第12-13页 |
| 2.2.2 目的基因的扩增和重组载体的构建 | 第13页 |
| 2.3 大鼠角膜基质细胞培养及转染 | 第13-14页 |
| 2.3.1 角膜基质细胞的鉴定 | 第13页 |
| 2.3.2 角膜基质细胞的转染 | 第13-14页 |
| 2.3.3 转染后Lmx1b的检测 | 第14页 |
| 2.4 RNA测序数据的生成 | 第14页 |
| 2.4.1 RNA的提取和纯化 | 第14页 |
| 2.4.2 测序文库的构建和测序 | 第14页 |
| 2.5 数据处理和分析 | 第14-15页 |
| 2.6 qRT-PCR检测 | 第15-16页 |
| 第三章 结果 | 第16-23页 |
| 3.1 重组真核表达载体pEGFP-Lmx1b的鉴定 | 第16-17页 |
| 3.2 大鼠角膜基质细胞鉴定 | 第17页 |
| 3.3 Lmx1b-GFP融合蛋白在大鼠角膜基质细胞的表达和定位 | 第17-18页 |
| 3.4 转录组数据分析 | 第18-23页 |
| 3.4.1 RNA测序质控和转录组整体质量评估 | 第18-19页 |
| 3.4.2 测序数据统计与比对情况 | 第19页 |
| 3.4.3 实验组VS对照组的差异表达基因 | 第19-21页 |
| 3.4.4 差异表达基因的GO(Gene ontology)分析 | 第21-22页 |
| 3.4.5 差异表达基因信号通路分析 | 第22-23页 |
| 3.4.6 青光眼疾病相关基因 | 第23页 |
| 第四章 讨论 | 第23-30页 |
| 4.1 含lmx1b组织的获得 | 第24页 |
| 4.2 重组表达载体构建和细胞转染的讨论 | 第24-25页 |
| 4.3 转录组数据的讨论 | 第25-30页 |
| 4.3.1 差异基因富集通路分析 | 第26-27页 |
| 4.3.2 青光眼相关基因 | 第27-29页 |
| 4.3.3 Lmx1b导致青光眼的机制 | 第29-30页 |
| 第五章 结论 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-37页 |
| 附录 | 第37-42页 |
| 致谢 | 第42页 |
