| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-17页 |
| 1.1 我国鱼类水产养殖现状 | 第13页 |
| 1.2 鱼类生长及其摄食行为 | 第13-14页 |
| 1.3 NPY的主要功能 | 第14页 |
| 1.4 NPY鱼类摄食相关研究进展 | 第14-15页 |
| 1.5 SUMO融合技术 | 第15页 |
| 1.6 本论文的研究目的及意义 | 第15-17页 |
| 第2章 神经肽Y的分子克隆及重组表达 | 第17-36页 |
| 2.1 引言 | 第17页 |
| 2.2 材料 | 第17-20页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第17页 |
| 2.2.2 试剂 | 第17-18页 |
| 2.2.3 培养基和试剂配方 | 第18-20页 |
| 2.2.4 主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.3 方法 | 第20-29页 |
| 2.3.1 引物的设计与合成 | 第20-21页 |
| 2.3.2 斜带石斑鱼脑总RNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.3.3 cDNA的合成 | 第22-23页 |
| 2.3.4 ecNPY基因扩增 | 第23-24页 |
| 2.3.5 连接pET-SUMO载体 | 第24页 |
| 2.3.6 ecNPY连接产物转化及测定重组子 | 第24-25页 |
| 2.3.7 IPTG诱导ecNPY菌株表达 | 第25页 |
| 2.3.8 诱导表达蛋白提取 | 第25-26页 |
| 2.3.9 总蛋白SDS-PAGE胶检测表达结果 | 第26页 |
| 2.3.10 亲和纯化目的蛋白 | 第26-27页 |
| 2.3.11 ULP酶切 | 第27页 |
| 2.3.12 纯化酶切蛋白 | 第27页 |
| 2.3.13 小分子蛋白凝胶Tris-Tricine PAGE检测目的蛋白 | 第27-28页 |
| 2.3.14 质谱鉴定目的片段 | 第28-29页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第29-33页 |
| 2.4.1 石斑鱼NPY基因扩增 | 第29-30页 |
| 2.4.2 ecNPY基因重组子测序结果 | 第30-31页 |
| 2.4.3 ecNPY总蛋白及融合蛋白的分离纯化 | 第31页 |
| 2.4.4 ecNPY融合蛋白表达条件优化 | 第31-32页 |
| 2.4.5 ecNPY融合蛋白酶切及酶切后纯化 | 第32-33页 |
| 2.4.6 ecNPY纯化蛋白质谱鉴定结果 | 第33页 |
| 2.5 讨论 | 第33-35页 |
| 2.6 本章小结 | 第35-36页 |
| 第3章 ecNPY生物活性的离体研究 | 第36-45页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 材料 | 第36-37页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第36页 |
| 3.2.2 试剂及培养基 | 第36页 |
| 3.2.3 离体培养培养基M199（含FBS）配方 | 第36页 |
| 3.2.4 主要仪器设备 | 第36-37页 |
| 3.3 方法 | 第37-40页 |
| 3.3.1 化学合成ecNPY | 第37页 |
| 3.3.2 鲤鱼下丘脑-垂体组织碎片的离体培养 | 第37页 |
| 3.3.3 不同浓度刺激下丘脑-垂体组织碎片的实验方案 | 第37-38页 |
| 3.3.4 荧光定量PCR检测下丘脑-垂体组织碎片中GH、GtH以及PSS-2 基因mRNA水平 | 第38-39页 |
| 3.3.4.1 引物的设计与合成 | 第38页 |
| 3.3.4.2 qPCR实验方案 | 第38-39页 |
| 3.3.5 统计学分析 | 第39-40页 |
| 3.4 结果与分析 | 第40-42页 |
| 3.4.1 s-ecNPY及r-ecNPY对离体孵育下丘脑-垂体组织碎片GH mRNA表达的影响 | 第40-41页 |
| 3.4.2 s-ecNPY及r-ecNPY对离体孵育下丘脑-垂体组织碎片GtH mRNA表达的影响 | 第41页 |
| 3.4.3 s-ecNPY及r-ecNPY对离体孵育下丘脑-垂体组织碎片PSS-2 mRNA表达的影响 | 第41-42页 |
| 3.5 讨论 | 第42-43页 |
| 3.6 本章小结 | 第43-45页 |
| 第4章 r-ecNPY的生物活性的在体研究 | 第45-53页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 材料 | 第45-46页 |
| 4.2.1 实验动物 | 第45页 |
| 4.2.2 主要试剂和商业饲料 | 第45页 |
| 4.2.3 主要仪器设备 | 第45-46页 |
| 4.3 方法 | 第46-48页 |
| 4.3.1 饲料的制备 | 第46页 |
| 4.3.2 饲养管理及方案 | 第46-47页 |
| 4.3.3 投喂试验结束后样品处理及相关营养指标的测定 | 第47页 |
| 4.3.4 统计学分析 | 第47-48页 |
| 4.4 结果分析 | 第48-50页 |
| 4.4.1 周摄食率变化 | 第48页 |
| 4.4.2 日摄食率计算结果 | 第48-49页 |
| 4.4.3 生长及相关营养指标的测定统计结果 | 第49-50页 |
| 4.4.4 鲤鱼主要组成成分比例 | 第50页 |
| 4.5 讨论 | 第50-52页 |
| 4.6 本章小结 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 创新点 | 第54页 |
| 今后值得开展的工作 | 第54-55页 |
| 附录 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 硕士期间学术成果 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 校对报告 | 第62页 |
