| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 英文缩略词中英文注释表 | 第10-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-39页 |
| 1.1 概述 | 第17页 |
| 1.2 肿瘤微环境 | 第17-29页 |
| 1.2.1 主要成分 | 第17-28页 |
| 1.2.2 调控肿瘤细胞 | 第28-29页 |
| 1.3 骨髓间质干细胞 | 第29-33页 |
| 1.3.1 骨髓间质干细胞与肿瘤 | 第30-31页 |
| 1.3.2 骨髓间质干细胞与肿瘤微环境 | 第31-32页 |
| 1.3.3 癌相关间质干细胞 | 第32-33页 |
| 1.4 microRNA与肿瘤微环境 | 第33-36页 |
| 1.5 本论文研究目的、方法、技术路线、预期结果及意义 | 第36-39页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第36页 |
| 1.5.2 研究方法 | 第36页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第36-38页 |
| 1.5.4 预期结果及意义 | 第38-39页 |
| 第二章 胃癌MSC异常表达的miRNAs筛选检测 | 第39-54页 |
| 2.1 材料 | 第39-40页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第39页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第39-40页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第40页 |
| 2.2 方法 | 第40-45页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第40-41页 |
| 2.2.2 胃癌细胞上清制备 | 第41页 |
| 2.2.3 胃癌细胞上清诱导骨髓MSC | 第41页 |
| 2.2.4 MSC培养上清制备 | 第41页 |
| 2.2.5 miRNA芯片筛选检测 | 第41-42页 |
| 2.2.6 miRNA提取 | 第42页 |
| 2.2.7 miRNA逆转录 | 第42-43页 |
| 2.2.8 miRNA定量PCR检测 | 第43页 |
| 2.2.9 免疫荧光染色 | 第43-44页 |
| 2.2.10 液相芯片luminex检测 | 第44页 |
| 2.2.11 细胞克隆形成 | 第44页 |
| 2.2.12 transewell迁移试验 | 第44-45页 |
| 2.2.13 侵袭试验 | 第45页 |
| 2.2.14 统计学分析 | 第45页 |
| 2.3 结果 | 第45-51页 |
| 2.3.1 芯片筛选胃癌MSC与癌旁MSC差异表达miRNAs | 第45-46页 |
| 2.3.2 定量PCR检测验证 | 第46页 |
| 2.3.3 胃癌细胞上清诱导后骨髓MSC表型分析 | 第46-48页 |
| 2.3.4 胃癌细胞上清诱导后骨髓MSC功能分析 | 第48-50页 |
| 2.3.5 胃癌细胞上清诱导前后骨髓MSC中miR-99a-5p的检测分析 | 第50-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-53页 |
| 2.5 小结 | 第53-54页 |
| 第三章 miR-99a-5p调控骨髓MSC向胃癌MSC转分化 | 第54-67页 |
| 3.1 材料 | 第55页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第55页 |
| 3.1.2 动物 | 第55页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第55页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第55页 |
| 3.2 方法 | 第55-57页 |
| 3.2.1 寡核苷酸片段溶解与分装 | 第55-56页 |
| 3.2.2 细胞转染 | 第56页 |
| 3.2.3 miRNAs提取、逆转录及定量PCR检测 | 第56页 |
| 3.2.4 MSC细胞上清制备 | 第56页 |
| 3.2.5 免疫荧光染色 | 第56页 |
| 3.2.6 细胞因子检测 | 第56页 |
| 3.2.7 克隆形成试验 | 第56-57页 |
| 3.2.8 迁移试验 | 第57页 |
| 3.2.9 侵袭试验 | 第57页 |
| 3.2.10 裸鼠皮下移植瘤模型 | 第57页 |
| 3.2.11 统计学分析 | 第57页 |
| 3.3 结果 | 第57-64页 |
| 3.3.1 骨髓MSC低表达miR-99a-5p | 第57-58页 |
| 3.3.2 低表达miR-99a-5p对骨髓MSC表型的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.3 低表达miR-99a-5p对骨髓MSC体外功能的影响 | 第59-62页 |
| 3.3.4 低表达miR-99a-5p对骨髓MSC体内功能的影响 | 第62页 |
| 3.3.5 过表达miR-99a-5p阻断胃癌细胞上清对骨髓MSC的诱导作用 | 第62-64页 |
| 3.4 讨论 | 第64-66页 |
| 3.5 小结 | 第66-67页 |
| 第四章 miR-99a-5p对胃癌MSC逆分化作用 | 第67-74页 |
| 4.1 材料 | 第67页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第67页 |
| 4.1.2 动物 | 第67页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第67页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第67页 |
| 4.2 方法 | 第67-69页 |
| 4.2.1 寡核苷酸片段溶解与分装 | 第67页 |
| 4.2.2 细胞转染 | 第67-68页 |
| 4.2.3 miRNAs提取、逆转录及定量PCR检测 | 第68页 |
| 4.2.4 胃癌MSC细胞上清制备 | 第68页 |
| 4.2.5 免疫荧光染色 | 第68页 |
| 4.2.6 细胞因子检测 | 第68页 |
| 4.2.7 克隆形成试验 | 第68页 |
| 4.2.8 迁移试验 | 第68页 |
| 4.2.9 侵袭试验 | 第68页 |
| 4.2.10 裸鼠皮下移植瘤模型 | 第68页 |
| 4.2.11 统计学分析 | 第68-69页 |
| 4.3 结果 | 第69-73页 |
| 4.3.1 胃癌MSC中高表达miR-99a-5p | 第69页 |
| 4.3.2 过表达miR-99a-5p对胃癌MSC表型的影响 | 第69-70页 |
| 4.3.3 过表达miR-99a-5p对胃癌MSC体外功能的影响 | 第70-72页 |
| 4.3.4 过表达miR-99a-5p对胃癌MSC体内功能的影响 | 第72-73页 |
| 4.4 讨论 | 第73-74页 |
| 4.5 小结 | 第74页 |
| 第五章 miR-99a-5p调控骨髓MSC向胃癌MSC转分化机制 | 第74-97页 |
| 5.1 材料 | 第75-76页 |
| 5.1.1 细胞株 | 第75页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第75-76页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第76页 |
| 5.2 方法 | 第76-81页 |
| 5.2.1 软件预测miR-99a-5p靶基因 | 第76页 |
| 5.2.2 靶基因野生型和突变型报告基因载体的构建 | 第76-80页 |
| 5.2.3 报告基因载体转染 | 第80页 |
| 5.2.4 报告基因检测 | 第80页 |
| 5.2.5 细胞蛋白提取 | 第80-81页 |
| 5.2.6 Western blot | 第81页 |
| 5.2.7 受体抑制剂处理MSC | 第81页 |
| 5.2.8 统计学分析 | 第81页 |
| 5.3 结果 | 第81-93页 |
| 5.3.1 miR-99a-5p靶基因筛选检测 | 第81-82页 |
| 5.3.2 miR-99a-5p调控靶基因的确定 | 第82-83页 |
| 5.3.3 胃癌细胞上清诱导后骨髓MSC、胃癌MSC中靶基因及相关信号通路的检测 | 第83-84页 |
| 5.3.4 靶基因干预对miR-99a-5p再编程骨髓MSC的影响 | 第84-88页 |
| 5.3.5 靶基因干预对胃癌细胞上清诱导骨髓MSC转分化的影响 | 第88-92页 |
| 5.3.6 FGFR3靶基因干预促进胃癌MSC逆分化 | 第92-93页 |
| 5.4 讨论 | 第93-95页 |
| 5.5 小结 | 第95-97页 |
| 第六章 结论与展望 | 第97-99页 |
| 6.1 结论 | 第97页 |
| 6.2 展望 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-125页 |
| 致谢 | 第125-127页 |
| 在学期间发表的研究论文及其他研究成果 | 第127页 |
