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广西西瓜甜瓜病毒种类及主要病毒遗传多样性研究

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-8页
1 前言第12-28页
    1.1 西甜瓜产业现状第12-13页
    1.2 葫芦科作物病毒概述第13-19页
        1.2.1 侵染葫芦科作物病毒种类的多样性第13-17页
        1.2.2 我国瓜类作物病毒研究概况第17-18页
        1.2.3 西甜瓜病毒广西分离物研究进展第18-19页
    1.3 3种西甜瓜病毒研究进展第19-24页
        1.3.1 瓜类褪绿黄化病毒(CCYV)的研究进展第19-20页
        1.3.2 甜瓜黄斑病毒(MYSV)的研究进展第20-22页
        1.3.3 甜瓜坏死斑点病毒(MNSV)的研究进展第22-24页
    1.4 西甜瓜病毒检测技术第24-27页
        1.4.1 生物学鉴定方法第24页
        1.4.2 电子显微镜鉴定法第24-25页
        1.4.3 血清学检测技术第25页
        1.4.4 分子生物学检测技术第25-27页
    1.5 本研究的目的和意义第27-28页
2 材料与方法第28-41页
    2.1 材料第28-29页
        2.1.1 西甜瓜病毒样本第28页
        2.1.2 实验试剂第28页
        2.1.3 主要实验仪器第28-29页
    2.2 方法第29-41页
        2.2.1 ELISA检测方法第29-30页
            2.2.1.1 间接ELISA第29-30页
            2.2.1.2 双抗夹心ELISA第30页
        2.2.2 RT-PCR检测第30-36页
            2.2.2.1 植物总RNA的提取第30-31页
            2.2.2.2 引物设计第31页
            2.2.2.3 一步RT-PCR扩增反应体系与条件第31-34页
            2.2.2.4 两步RT-PCR扩增反应第34-35页
            2.2.2.5 PCR产物的纯化与回收第35-36页
        2.2.3 DNA分子克隆测序第36-39页
            2.2.3.1 DNA连接反应第36-37页
            2.2.3.2 重组质粒转化第37页
            2.2.3.3 质粒DNA提取第37-39页
            2.2.3.4 质粒酶切验证第39页
            2.2.3.5 核酸序列的测定及分析第39页
        2.2.4 一步法多重RT-PCR检测方法的建立第39-41页
            2.2.4.1 多重RT-PCR总RNA提取第39-40页
            2.2.4.2 多重RT-PCR引物设计与筛选第40页
            2.2.4.3 多重RT-PCR的反应体系及条件第40-41页
3 结果与分析第41-77页
    3.1 广西西甜瓜病毒病病原检测第41-49页
        3.1.1 广西西甜瓜病毒病田间症状与样本采集第41-43页
        3.1.2 西甜瓜病毒样本ELISA检测第43-45页
        3.1.3 广西西甜瓜病毒病病原的分子鉴定第45-49页
            3.1.3.1 西甜瓜病叶总RNA的提取第46页
            3.1.3.2 甜瓜褪绿黄化病毒的分子检测第46-47页
            3.1.3.3 甜瓜黄化斑点病毒的分子检测第47页
            3.1.3.4 甜瓜坏死斑病毒的分子检测第47-48页
            3.1.3.5 RT-PCR检测结果第48-49页
    3.2 三种甜瓜病毒分子克隆测序与分析第49-70页
        3.2.1 瓜类褪绿黄化病毒(CCYV)克隆测序与分析第50-60页
            3.2.1.1 RNA2近全长序列同源性及变异分析第50-54页
            3.2.1.2 RNA1近全长序列同源性及变异分析第54-58页
            3.2.1.3 CCYV系统进化树分析第58-60页
        3.2.2 甜瓜黄斑病毒(MYSV)SRNA克隆测序与分析第60-65页
            3.2.2.1 MYSV SRNA近全长核苷酸序列分析第61-63页
            3.2.2.2 MYSV S RNA系统进化树分析第63-65页
        3.2.3 甜瓜坏死斑点病毒(MNSV)全长克隆测序与分析第65-70页
            3.2.3.1 MNSV近全长核苷酸序列分析第65-68页
            3.2.3.2 MNSV系统进化树分析第68-70页
    3.3 一步法多重RT-PCR检测方法的建立第70-77页
        3.3.1 用于多重RT-PCR构建的总RNA提取第70-71页
        3.3.2 单重RT-PCR条件探索第71-73页
        3.3.3 两重RT-PCR条件探索第73-74页
        3.3.4 三重RT-PCR建立第74-75页
        3.3.5 多重RT-PCR灵敏度测试和田间样品验证第75-77页
4 讨论与结论第77-82页
    4.1 讨论第77-80页
        4.1.1 广西西甜瓜病毒检测第77-78页
        4.1.2 3种甜瓜病毒序列分析第78-80页
        4.1.3 一步多重RT-PCR方法的建立第80页
    4.2 结论第80-82页
参考文献第82-92页
附录Ⅰ 实验过程中所用到的溶液及培养基配制第92-94页
附录Ⅱ 论文中用到的分离物信息第94-96页
致谢第96-97页
攻读学位期间发表论文情况第97页

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