| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 1 前言 | 第12-28页 |
| 1.1 西甜瓜产业现状 | 第12-13页 |
| 1.2 葫芦科作物病毒概述 | 第13-19页 |
| 1.2.1 侵染葫芦科作物病毒种类的多样性 | 第13-17页 |
| 1.2.2 我国瓜类作物病毒研究概况 | 第17-18页 |
| 1.2.3 西甜瓜病毒广西分离物研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3 3种西甜瓜病毒研究进展 | 第19-24页 |
| 1.3.1 瓜类褪绿黄化病毒(CCYV)的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3.2 甜瓜黄斑病毒(MYSV)的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.3.3 甜瓜坏死斑点病毒(MNSV)的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.4 西甜瓜病毒检测技术 | 第24-27页 |
| 1.4.1 生物学鉴定方法 | 第24页 |
| 1.4.2 电子显微镜鉴定法 | 第24-25页 |
| 1.4.3 血清学检测技术 | 第25页 |
| 1.4.4 分子生物学检测技术 | 第25-27页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-41页 |
| 2.1 材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 西甜瓜病毒样本 | 第28页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 方法 | 第29-41页 |
| 2.2.1 ELISA检测方法 | 第29-30页 |
| 2.2.1.1 间接ELISA | 第29-30页 |
| 2.2.1.2 双抗夹心ELISA | 第30页 |
| 2.2.2 RT-PCR检测 | 第30-36页 |
| 2.2.2.1 植物总RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.2.2 引物设计 | 第31页 |
| 2.2.2.3 一步RT-PCR扩增反应体系与条件 | 第31-34页 |
| 2.2.2.4 两步RT-PCR扩增反应 | 第34-35页 |
| 2.2.2.5 PCR产物的纯化与回收 | 第35-36页 |
| 2.2.3 DNA分子克隆测序 | 第36-39页 |
| 2.2.3.1 DNA连接反应 | 第36-37页 |
| 2.2.3.2 重组质粒转化 | 第37页 |
| 2.2.3.3 质粒DNA提取 | 第37-39页 |
| 2.2.3.4 质粒酶切验证 | 第39页 |
| 2.2.3.5 核酸序列的测定及分析 | 第39页 |
| 2.2.4 一步法多重RT-PCR检测方法的建立 | 第39-41页 |
| 2.2.4.1 多重RT-PCR总RNA提取 | 第39-40页 |
| 2.2.4.2 多重RT-PCR引物设计与筛选 | 第40页 |
| 2.2.4.3 多重RT-PCR的反应体系及条件 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-77页 |
| 3.1 广西西甜瓜病毒病病原检测 | 第41-49页 |
| 3.1.1 广西西甜瓜病毒病田间症状与样本采集 | 第41-43页 |
| 3.1.2 西甜瓜病毒样本ELISA检测 | 第43-45页 |
| 3.1.3 广西西甜瓜病毒病病原的分子鉴定 | 第45-49页 |
| 3.1.3.1 西甜瓜病叶总RNA的提取 | 第46页 |
| 3.1.3.2 甜瓜褪绿黄化病毒的分子检测 | 第46-47页 |
| 3.1.3.3 甜瓜黄化斑点病毒的分子检测 | 第47页 |
| 3.1.3.4 甜瓜坏死斑病毒的分子检测 | 第47-48页 |
| 3.1.3.5 RT-PCR检测结果 | 第48-49页 |
| 3.2 三种甜瓜病毒分子克隆测序与分析 | 第49-70页 |
| 3.2.1 瓜类褪绿黄化病毒(CCYV)克隆测序与分析 | 第50-60页 |
| 3.2.1.1 RNA2近全长序列同源性及变异分析 | 第50-54页 |
| 3.2.1.2 RNA1近全长序列同源性及变异分析 | 第54-58页 |
| 3.2.1.3 CCYV系统进化树分析 | 第58-60页 |
| 3.2.2 甜瓜黄斑病毒(MYSV)SRNA克隆测序与分析 | 第60-65页 |
| 3.2.2.1 MYSV SRNA近全长核苷酸序列分析 | 第61-63页 |
| 3.2.2.2 MYSV S RNA系统进化树分析 | 第63-65页 |
| 3.2.3 甜瓜坏死斑点病毒(MNSV)全长克隆测序与分析 | 第65-70页 |
| 3.2.3.1 MNSV近全长核苷酸序列分析 | 第65-68页 |
| 3.2.3.2 MNSV系统进化树分析 | 第68-70页 |
| 3.3 一步法多重RT-PCR检测方法的建立 | 第70-77页 |
| 3.3.1 用于多重RT-PCR构建的总RNA提取 | 第70-71页 |
| 3.3.2 单重RT-PCR条件探索 | 第71-73页 |
| 3.3.3 两重RT-PCR条件探索 | 第73-74页 |
| 3.3.4 三重RT-PCR建立 | 第74-75页 |
| 3.3.5 多重RT-PCR灵敏度测试和田间样品验证 | 第75-77页 |
| 4 讨论与结论 | 第77-82页 |
| 4.1 讨论 | 第77-80页 |
| 4.1.1 广西西甜瓜病毒检测 | 第77-78页 |
| 4.1.2 3种甜瓜病毒序列分析 | 第78-80页 |
| 4.1.3 一步多重RT-PCR方法的建立 | 第80页 |
| 4.2 结论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-92页 |
| 附录Ⅰ 实验过程中所用到的溶液及培养基配制 | 第92-94页 |
| 附录Ⅱ 论文中用到的分离物信息 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第97页 |
