| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-29页 |
| ·牡蛎疱疹病毒魁蚶株的发现 | 第13-14页 |
| ·分子生物技术在病原检测中的应用 | 第14-22页 |
| ·聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR） | 第15-16页 |
| ·实时荧光定量PCR技术 | 第16-18页 |
| ·荧光染料法 | 第16-17页 |
| ·荧光探针法 | 第17-18页 |
| ·等温扩增技术 | 第18-22页 |
| ·环介导等温扩增技术 | 第19-20页 |
| ·交叉引物等温扩增技术 | 第20-22页 |
| ·奥尔森派琴虫研究进展 | 第22-25页 |
| ·派琴虫的发现 | 第22-23页 |
| ·派琴虫感染症状 | 第23页 |
| ·常用派琴虫检测方法 | 第23-25页 |
| ·FIM法检测派琴虫 | 第23页 |
| ·免疫学技术检测派琴虫 | 第23-24页 |
| ·荧光PCR技术检测派琴虫 | 第24页 |
| ·PCR技术检测派琴虫 | 第24页 |
| ·荧光定量PCR技术检测派琴虫 | 第24-25页 |
| ·急性病毒性坏死病毒（AVNV）研究进展 | 第25-27页 |
| ·AVNV诊断技术的发展 | 第25-26页 |
| ·AVNV功能基因的研究进展 | 第26-27页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第27-28页 |
| 本论文的研究意义 | 第28-29页 |
| 第二章 牡蛎疱疹病毒魁蚶株交叉引物等温扩增检测方法的建立及初步应用 | 第29-44页 |
| ·实验材料 | 第30页 |
| ·魁蚶病料 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·仪器设备 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-35页 |
| ·CPA引物设计 | 第30-31页 |
| ·OsHV1SB粗提液的制备和病毒总DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·OsHV1SB的CPA反应初始体系配比和反应条件 | 第32-33页 |
| ·OsHV1SB的CPA反应条件优化 | 第33页 |
| ·反应温度的优化 | 第33页 |
| ·MgCl_2浓度的优化 | 第33页 |
| ·dNTPs浓度的优化 | 第33页 |
| ·反应时间的优化 | 第33页 |
| ·OsHV1SB的CPA反应产物的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·OsHV1SB的CPA反应灵敏度实验 | 第33-34页 |
| ·靶序列引物设计 | 第34页 |
| ·重组质粒的构建 | 第34-35页 |
| ·OsHV1SB的CPA反应特异性实验 | 第35页 |
| ·实际样品的检测 | 第35页 |
| ·实验结果 | 第35-42页 |
| ·CPA反应条件的优化 | 第35-38页 |
| ·反应温度的优化结果 | 第35-36页 |
| ·MgCl_2浓度的优化结果 | 第36-37页 |
| ·dNTPs浓度的优化结果 | 第37页 |
| ·反应时间的优化结果 | 第37-38页 |
| ·CPA产物的酶切鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·CPA灵敏度实验结果 | 第39页 |
| ·CPA特异性实验结果 | 第39-40页 |
| ·CPA产物可视化鉴定结果 | 第40-41页 |
| ·CPA检测实际魁蚶样品的应用 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 贝类奥尔森派琴虫流行病学调查 | 第44-52页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·贝类样品 | 第44页 |
| ·实验试剂 | 第44页 |
| ·仪器设备 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-46页 |
| ·引物合成 | 第45页 |
| ·检测样品DNA的提取 | 第45页 |
| ·样品的PCR检测 | 第45-46页 |
| ·检测结果汇总分析 | 第46页 |
| ·实验结果 | 第46-50页 |
| ·贝类样品DNA浓度检测结果 | 第46页 |
| ·样品检测结果分析 | 第46-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 急性病毒性坏死病毒多重跨膜蛋白基因毕赤酵母真核表达系统的构建 | 第52-61页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·AVNV病料和菌株 | 第53页 |
| ·实验试剂 | 第53页 |
| ·仪器设备 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-58页 |
| ·引物设计 | 第53-54页 |
| ·ORF110 基因的克隆 | 第54-55页 |
| ·重组质粒pPIC9k-ORF110 的构建 | 第55-56页 |
| ·重组质粒线性化 | 第56-57页 |
| ·重组质粒的电转化 | 第57页 |
| ·PCR验证表达菌株的构建 | 第57页 |
| ·pPIC9k-ORF110 的毕赤酵母诱导表达 | 第57-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-60页 |
| ·ORF110 基因的TA克隆 | 第58页 |
| ·重组质粒pPIC9k-ORF110 的酶切验证 | 第58-59页 |
| ·毕赤酵母重组菌GS115（pPIC9k-ORF110）的鉴定 | 第59-60页 |
| ·重组菌GS115( pPIC9k-ORF110 )的诱导表达 | 第60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| 小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
