| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 前言 | 第11-23页 |
| ·免疫毒素 | 第11-13页 |
| ·免疫毒素的研究背景 | 第11-12页 |
| ·共轭免疫毒素 | 第12页 |
| ·重组免疫毒素 | 第12页 |
| ·临床上的免疫毒素 | 第12-13页 |
| ·重组免疫毒素存在的问题及未来的发展 | 第13页 |
| ·海葵溶细胞素 | 第13-17页 |
| ·海葵溶细胞素的简介 | 第14页 |
| ·海葵溶细胞素的结构 | 第14-16页 |
| ·海葵溶细胞素用于免疫毒素 | 第16-17页 |
| ·Gigantoxin-4 | 第17-19页 |
| ·Gigantoxin-4的发现 | 第17页 |
| ·Gigantoxin-4的序列 | 第17-18页 |
| ·Gigantoxin-4的结构 | 第18页 |
| ·Gigantoxin-4裂解脂膜 | 第18-19页 |
| ·Gigantoxin-4抗肿瘤特性 | 第19页 |
| ·人表皮生长因子受体-2的简介 | 第19-20页 |
| ·4D5 scFv | 第20-21页 |
| ·4D5 scFv的简介 | 第20-21页 |
| ·4D5 scFv在免疫疗法中的应用 | 第21页 |
| ·本课题的研究背景、意义和内容 | 第21-23页 |
| ·本课题的研究背景、意义 | 第21-22页 |
| ·研究内容 | 第22-23页 |
| 第2章 重组免疫毒素Gigantoxin-4-4D5 scFv的构建、表达及纯化 | 第23-40页 |
| ·引言 | 第23页 |
| ·材料与方法 | 第23-31页 |
| ·菌株和质粒 | 第23-24页 |
| ·主要实验仪器 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·培养基和主要溶液的配制方法 | 第25-26页 |
| ·实验流程 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-38页 |
| ·PCR扩增SUMO、Gigantoxin-4和4D5 scFv | 第31-32页 |
| ·融合PCR扩增SUMO-Gigantoxin-4-4D5 scFv和SUMO-Gigantoxin-4 | 第32页 |
| ·重组菌的验证 | 第32-33页 |
| ·重组蛋白诱导表达 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白镍柱纯化 | 第34-35页 |
| ·SUMO蛋白酶酶切及纯化 | 第35-36页 |
| ·离子交换纯化Gigantoxin-4-4D5 scFv | 第36-38页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第38页 |
| ·本章小结 | 第38-40页 |
| 第3章 重组免疫毒素Gigantoxin-4-4D5 scFv体外抗肿瘤活性研究 | 第40-60页 |
| ·引言 | 第40页 |
| ·材料与方法 | 第40-44页 |
| ·细胞株 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·主要溶液配制 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-57页 |
| ·Gigantoxin-4-4D5 scFv的溶血活性 | 第44-45页 |
| ·Gigantoxin-4-4D5 scFv抑制细胞增殖 | 第45-47页 |
| ·Gigantoxin-4-4D5 scFv选择性识别SK-OV-3细胞 | 第47-48页 |
| ·4D5 scFv干扰Gigantoxin-4-4D5 scFv对SK-OV-3细胞的抑制作用 | 第48-49页 |
| ·Gigantoxin-4-4D5 scFv破坏SK-OV-3细胞膜 | 第49-51页 |
| ·Gigantoxin-4-4D5 scFv引起LDH释放 | 第51-53页 |
| ·Gigantoxin-4-4D5 scFv诱导细胞凋亡 | 第53-57页 |
| ·本章小结 | 第57-60页 |
| 第4章 重组免疫毒素Gigantoxin-4-4D5 scFv链接优化 | 第60-73页 |
| ·引言 | 第60-61页 |
| ·材料与方法 | 第61-63页 |
| ·质粒与菌株 | 第61页 |
| ·细胞株 | 第61页 |
| ·主要实验器 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61页 |
| ·主要溶液的配制 | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62-63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-71页 |
| ·重组载体的构建 | 第63页 |
| ·重组菌的验证 | 第63-64页 |
| ·重组蛋白表达 | 第64页 |
| ·重组蛋白的镍柱纯化 | 第64-65页 |
| ·重组蛋白SUMO标签的去除 | 第65-66页 |
| ·离子交换纯化重组蛋白 | 第66-68页 |
| ·重组蛋白的溶血活性的测定 | 第68页 |
| ·MTT检测重组蛋白对于SK-OV-3细胞的作用 | 第68-69页 |
| ·Antheprot和ProtScale分析重组蛋白的理化性质 | 第69-71页 |
| ·本章小结 | 第71-73页 |
| 第5章 结论与展望 | 第73-76页 |
| ·结论 | 第73-74页 |
| ·重组免疫毒素Gigantoxin-4-4D5 scFv的构建、表达及纯化 | 第73页 |
| ·Gigantoxin-4-4D5 scFv体外抗肿瘤活性研究 | 第73-74页 |
| ·Gigantoxin-4-4D5 scFv链接优化 | 第74页 |
| ·展望 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 研究成果 | 第84页 |
