| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-25页 |
| ·酶的稳定性改造方法 | 第11-13页 |
| ·定向进化 | 第11-12页 |
| ·定点突变 | 第12-13页 |
| ·糖基改性 | 第13页 |
| ·蛋白质糖基化修饰 | 第13-18页 |
| ·蛋白质糖基化类型 | 第14-15页 |
| ·糖基化对蛋白质的影响 | 第15-16页 |
| ·蛋白糖基化修饰的研究方法 | 第16-18页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶 | 第18-21页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶的简介 | 第18-19页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶的酶学特性 | 第19页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶的结构 | 第19-20页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶的糖基化进展 | 第20-21页 |
| ·毕赤酵母( Pichia pastoris )糖基化表达系统 | 第21-23页 |
| ·毕赤酵母的基本特性 | 第21页 |
| ·毕赤酵母表达蛋白的糖基化特征 | 第21-22页 |
| ·影响毕赤酵母糖基化的因素 | 第22-23页 |
| ·论文研究意义及技术路线 | 第23-25页 |
| ·论文的研究意义 | 第23页 |
| ·技术路线 | 第23-25页 |
| 第2章 材料与方法 | 第25-39页 |
| ·材料 | 第25-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·培养基和溶液 | 第25-27页 |
| ·试剂与药品 | 第27-28页 |
| ·仪器与设备 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-39页 |
| ·微生物的培养 | 第29页 |
| ·主要基因操作方法 | 第29-34页 |
| ·重组酶的表达 | 第34页 |
| ·重组蛋白的纯化及 SDS-PAGE 分析 | 第34-35页 |
| ·糖蛋白 PAS 染色 | 第35-36页 |
| ·糖蛋白糖苷酶 F 酶切 | 第36页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶的活性和蛋白浓度测定 | 第36-37页 |
| ·酶催化特性的测定 | 第37-38页 |
| ·构象分析 | 第38-39页 |
| 第3章 β-葡萄糖醛酸苷酶 N-糖基化位点的构建及其表达 | 第39-49页 |
| 引言 | 第39页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶新 N-糖基化位点的设计 | 第39-41页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶 N-糖基化位点分析 | 第39-40页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶空间结构模拟分析 | 第40-41页 |
| ·新 N-糖基化位点及其表达体系的构建 | 第41-44页 |
| ·新 N-糖基化位点的突变原理及引物设计 | 第41-42页 |
| ·P. pastoris 表达穿梭质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·突变酶 P. pastoris 表达体系的构建 | 第43-44页 |
| ·突变酶的在毕赤酵母中的表达与纯化 | 第44-47页 |
| ·突变酶的表达 | 第44页 |
| ·突变酶的活性筛选 | 第44-45页 |
| ·突变酶的糖基化分析 | 第45-46页 |
| ·突变酶的分离纯化及活力测定 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-49页 |
| 第4章 N-糖基化位点对重组β-葡萄糖醛酸苷酶的影响 | 第49-62页 |
| 引言 | 第49页 |
| ·突变酶在非糖基化原核表达系统中的构建及表达 | 第49-52页 |
| ·突变酶原核表达体系的构建 | 第49-50页 |
| ·突变酶在大肠杆菌 BL21(DE3)Star 的表达及纯化 | 第50-51页 |
| ·原核表达突变酶的酶活分析 | 第51-52页 |
| ·N-糖基化位点对β-葡萄糖醛酸苷酶酶学性质及催化特性的影响 | 第52-58页 |
| ·对最适反应温度的影响 | 第52-53页 |
| ·对最适反应 pH 的影响 | 第53-54页 |
| ·对温度稳定性的影响 | 第54-55页 |
| ·对 pH 稳定性的影响 | 第55-56页 |
| ·对酶反应动力学常数的影响 | 第56-57页 |
| ·糖基化β-葡萄糖醛酸苷酶催化甘草酸的水解反应 | 第57-58页 |
| ·N-糖基化位点对β-葡萄糖醛酸苷酶结构的影响 | 第58-60页 |
| ·荧光光谱三级结构分析 | 第58-59页 |
| ·糖链对接与空间结构模拟分析 | 第59-60页 |
| ·小结 | 第60-62页 |
| 第5章 结论与展望 | 第62-64页 |
| ·结论 | 第62-63页 |
| ·展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
| 攻读学位期间发表论文与研究成果清单 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
