| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-15页 |
| ·象耳豆根结线虫研究进展 | 第10-11页 |
| ·肌动蛋白简介 | 第11页 |
| ·植物寄生线虫Hsp70研究进展 | 第11-14页 |
| ·Hsp70家族的分类 | 第11-12页 |
| ·Hsp70的结构及其生物学功能 | 第12页 |
| ·植物寄生线虫Hsp70的研究 | 第12-13页 |
| ·展望 | 第13-14页 |
| ·研究目的与意义 | 第14页 |
| ·研究的技术路线 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-34页 |
| ·供试线虫 | 第15页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第15页 |
| ·主要试剂及培养基配制 | 第15页 |
| ·象耳豆根结线虫种群的纯化与培养 | 第15-16页 |
| ·象耳豆根结线虫的鉴定 | 第15-16页 |
| ·象耳豆根结线虫的培养 | 第16页 |
| ·象耳豆根结线虫J2的获得 | 第16页 |
| ·总RNA的提取 | 第16-17页 |
| ·TRIzon提取法 | 第16-17页 |
| ·试剂盒提取法(动物组织总RNA提取试剂盒) | 第17页 |
| ·cDNA的合成 | 第17-18页 |
| ·无RNase的DNase处理 | 第17-18页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第18页 |
| ·象耳豆根结线虫Actin和Hsp70基因核心序列的克隆 | 第18-20页 |
| ·Hsp70简并引物的设计与合成 | 第18页 |
| ·象耳豆根结线虫Actin基因中间片段的克隆 | 第18-19页 |
| ·象耳豆根结线虫Hsp70基因中间片段的克隆 | 第19页 |
| ·目的片段的回收 | 第19-20页 |
| ·目的片段与T-载体的连接 | 第20页 |
| ·质粒转化 | 第20页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第20页 |
| ·重组质粒的测序及分析 | 第20页 |
| ·RACE法获得象耳豆根结线虫Actin和Hsp70基因全长cDNA | 第20-25页 |
| ·3’和5’RACE cDNA第一链的合成 | 第20-22页 |
| ·象耳豆根结线虫Actin和Hsp70基因3'RACE | 第22-23页 |
| ·象耳豆根结线虫Actin和Hsp70基因5'RACE | 第23-25页 |
| ·象耳豆根结线虫Actin cDNA和Hsp70 cDNA全长序列的确定 | 第25页 |
| ·生物信息学分析 | 第25-26页 |
| ·象耳豆根结线虫Hsp70的原核表达 | 第26-34页 |
| ·象耳豆根结线虫Hsp70原核表达载体的构建 | 第26-32页 |
| ·Hsp70在BL21(DE3)中的诱导表达及蛋白样品的制备 | 第32-33页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳检测 | 第33-34页 |
| ·转化菌株的高温胁迫处理 | 第34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-53页 |
| ·象耳豆根结线虫的鉴定 | 第34页 |
| ·RNA的质量分析 | 第34-35页 |
| ·象耳豆根结线虫Actin和Hsp70基因的克隆与序列分析 | 第35-47页 |
| ·象耳豆根结线虫Actin和Hsp70基因中间片段cDNA序列的克隆 | 第35-36页 |
| ·象耳豆根结线虫Actin和Hsp70基因3'RACE克隆与序列分析 | 第36页 |
| ·象耳豆根结线虫Actin和Hsp70基因5'RACE克隆与序列分析 | 第36-37页 |
| ·象耳豆根结线虫Actin cDNA和Hsp70 cDNA全长序列的确定 | 第37-40页 |
| ·象耳豆根结线虫Actin和Hsp70序列分析和同源性比较 | 第40-43页 |
| ·象耳豆根结线虫Actin和Hsp70进化分析 | 第43-45页 |
| ·象耳豆根结线虫Hsp70蛋白结构和功能的预测 | 第45-47页 |
| ·pEASY-E1-MeHsp70、pET30-MeHsp70表达载体的构建及目的蛋白的诱导表达 | 第47-53页 |
| ·重组质粒pEASY-E1-MeHsp70构建结果 | 第47-49页 |
| ·重组质粒pET30-MeHsp70的构建结果 | 第49-51页 |
| ·重组质粒pEASY-E1-MeHsp70、pET30a-MeHsp70转化受体细菌转化子的筛选 | 第51-52页 |
| ·Hsp70的表达 | 第52-53页 |
| ·异源表达Hsp70基因提高大肠杆菌的耐热力 | 第53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| ·M. enterolobii Actin | 第53-54页 |
| ·M. enterolobii Hsp70 | 第54-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| ·M. enterolobii Actin | 第55页 |
| ·M. enterolobii Hsp70 | 第55-56页 |
| 6 有待进一步研究之处 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 缩略表 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
