| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 TDG修复G:U错配的结构域的界定 | 第8-35页 |
| 第一节 TDG截短变体的构建 | 第8-19页 |
| ·实验材料 | 第8-11页 |
| ·菌株 | 第8-9页 |
| ·试剂 | 第9页 |
| ·质粒 | 第9-10页 |
| ·引物 | 第10-11页 |
| ·实验方法 | 第11-15页 |
| ·TDG截短变体的构建策略 | 第11-12页 |
| ·TDG截短变体重组质粒的构建 | 第12-15页 |
| ·实验结果与分析 | 第15-18页 |
| ·截短变体结构示意图 | 第15-16页 |
| ·PCR扩增截短变体基因片段 | 第16-17页 |
| ·截短变体重组质粒的构建 | 第17-18页 |
| ·小结 | 第18-19页 |
| 第二节 TDG截短变体系列融合蛋白的纯化 | 第19-25页 |
| ·实验材料 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-22页 |
| ·Ni~+柱添加新Ni~+离子 | 第19-20页 |
| ·截短变体的表达 | 第20页 |
| ·截短变体融合蛋白的Ni~+柱纯化 | 第20-21页 |
| ·截短变体融合蛋白的pull-down纯化 | 第21页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第21-22页 |
| ·实验结果与分析 | 第22-24页 |
| ·截短变体融合蛋白的预纯化 | 第22-23页 |
| ·截短变体融合蛋白的pull down纯化 | 第23-24页 |
| ·小结 | 第24-25页 |
| 第三节 TDG的G:U错配修复活性中心的确定 | 第25-33页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·试剂 | 第25-26页 |
| ·引物 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-28页 |
| ·退火形成异源双链 | 第26-27页 |
| ·体外测活 | 第27页 |
| ·G:U错配体外测活原理图 | 第27-28页 |
| ·实验结果与分析 | 第28-32页 |
| ·N-端截短变体的G:U错配修复活性分析 | 第28-29页 |
| ·C-端截短变体的G:U错配修复活性分析 | 第29-30页 |
| ·mTDG维持G:U错配修复的结构域的界定 | 第30-32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-35页 |
| 第二章 分子动力学模拟探讨TDG变体结构及功能影响 | 第35-55页 |
| 1. 材料和方法 | 第36页 |
| 2. 结果与分析 | 第36-53页 |
| ·N-末端截取的蛋白质变体分析 | 第36-44页 |
| ·突变体148模拟结果 | 第37-39页 |
| ·突变体149模拟结果 | 第39-41页 |
| ·突变体148和149结构比较与活性关联分析 | 第41-44页 |
| ·C-末端截取的蛋白质变体分析 | 第44-53页 |
| ·突变体278模拟结果 | 第44-46页 |
| ·突变体279模拟结果 | 第46-48页 |
| ·突变体280模拟结果 | 第48-50页 |
| ·突变体278、279和280结构比较与活性分析 | 第50-53页 |
| 3. 小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-55页 |
| 第三章 综述 | 第55-70页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |