利用Gateway技术构建植物表达载体与植物筛选标记研究
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| ·研究背景 | 第12-14页 |
| ·双元载体的研究背景 | 第12页 |
| ·Gateway技术的研究背景 | 第12-13页 |
| ·抗草甘膦基因的研究背景 | 第13-14页 |
| ·dsdA筛选标记的研究背景 | 第14页 |
| ·研究现状 | 第14-18页 |
| ·双元载体的研究现状 | 第14-15页 |
| ·Gateway技术的研究现状 | 第15-16页 |
| ·抗草甘膦基因的研究现状 | 第16-17页 |
| ·dsdA基因的研究进展 | 第17-18页 |
| ·研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 2 GATEWAY双元表达载体的构建 | 第20-42页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·植物材料以及试剂 | 第20页 |
| ·引物及测序所用生物软件 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-34页 |
| ·pYBA载体骨架改造 | 第21-24页 |
| ·链霉素基因的获得 | 第24-25页 |
| ·Ter、sm和ColE片段融合 | 第25-26页 |
| ·载体骨架的获得 | 第26-27页 |
| ·HindⅢ位点的补平 | 第27-28页 |
| ·多克隆位点MCS的添加 | 第28页 |
| ·植物筛选标记基因表达框的整合 | 第28页 |
| ·35sPromotor和35spolyA的整合 | 第28-30页 |
| ·荧光蛋白的整合 | 第30-31页 |
| ·Gateway重组位点attR的整合 | 第31-32页 |
| ·构建入门载体 | 第32页 |
| ·Gateway重组反应 | 第32-33页 |
| ·Inoue法制备大肠杆菌热击感受态细胞 | 第33页 |
| ·农杆菌感受态制备 | 第33-34页 |
| ·50×TAE配置方法(1L) | 第34页 |
| ·结果与分析 | 第34-40页 |
| ·pYBA载体骨架改造 | 第34-35页 |
| ·ColE、sm、Ter融合片段的获得以及融合 | 第35页 |
| ·pYBAG载体骨架的获得 | 第35-36页 |
| ·HindⅢ位点的补平 | 第36-37页 |
| ·多克隆位点MCS的添加 | 第37页 |
| ·筛选标记基因表达框的整合 | 第37页 |
| ·35sPromotor和35spolyA的整合 | 第37-38页 |
| ·荧光蛋白的整合 | 第38-39页 |
| ·Gateway载体中attR片段的整合 | 第39-40页 |
| ·构建入门载体 | 第40页 |
| ·Gateway重组反应 | 第40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 3 四种抗草甘膦基因的抗性比较及检测 | 第42-54页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-46页 |
| ·草甘膦抗性基因的获得 | 第42-43页 |
| ·植物转化双元载体构建 | 第43-44页 |
| ·拟南芥的遗传转化及阳性苗的筛选 | 第44页 |
| ·草甘膦抗性的鉴定 | 第44页 |
| ·基因表达量的定量PCR检测 | 第44-45页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-52页 |
| ·抗性基因的获得与载体构建 | 第46页 |
| ·拟南芥的遗传转化及转基因阳性苗的筛选 | 第46-47页 |
| ·草甘膦抗性的比较 | 第47-49页 |
| ·喷施草甘膦后抗性苗的不良症状 | 第49-50页 |
| ·草甘膦抗性与基因表达量的关系 | 第50-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 4 DSDA的获得和植物抗性验证 | 第54-60页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-56页 |
| ·dsdA基因的获取 | 第54-55页 |
| ·dsdA基因的定点突变 | 第55-56页 |
| ·dsdA基因与植物表达载体的整合 | 第56页 |
| ·dsdA植物筛选标记基因表达框的构建 | 第56页 |
| ·筛选标记DSDA的克隆和整合 | 第56-58页 |
| ·dsdA基因的获取 | 第56-57页 |
| ·dsdA的定点突变 | 第57-58页 |
| ·dsdA基因与植物表达载体的整合及筛选检测 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
