| 摘要 | 第1-8页 |
| 文献综述 | 第8-16页 |
| 1 猪肺炎支原体研究进展 | 第8-10页 |
| ·病原学 | 第8页 |
| ·Mhp的分离和培养 | 第8-9页 |
| ·猪肺炎支原体的致病机理 | 第9-10页 |
| 2 支原体蛋白质组学研究进展 | 第10-16页 |
| ·蛋白质组学技术概述 | 第10-12页 |
| ·细菌差异蛋白组研究进展 | 第12-13页 |
| ·支原体蛋白质组学研究进展 | 第13-16页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 试验一 猪肺炎支原体168株强弱毒株差异蛋白的分析 | 第17-33页 |
| 1 材料 | 第17-21页 |
| ·菌种与培养基 | 第17页 |
| ·试剂 | 第17页 |
| ·仪器 | 第17-18页 |
| ·主要溶液及配制 | 第18-21页 |
| 2 方法 | 第21-26页 |
| ·猪肺炎支原体的复苏与扩大培养 | 第21页 |
| ·Mhp菌体蛋白的制备与纯化 | 第21-22页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第22-23页 |
| ·菌体蛋白双向电泳 | 第23-25页 |
| ·凝胶扫描及软件分析 | 第25页 |
| ·质谱样本制备及分析 | 第25页 |
| ·Western-blot验证 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-32页 |
| ·猪肺炎支原体全菌蛋白2-DE样品的制备 | 第26-27页 |
| ·不同聚焦伏时数(Voltage×Hour,Vh)的双向电泳图 | 第27-28页 |
| ·Mhp168强弱毒株的双向电泳图谱 | 第28-30页 |
| ·MALDI-TOF-MS结果 | 第30-31页 |
| ·Western-blot结果 | 第31-32页 |
| 4 小结 | 第32-33页 |
| 试验二 猪肺炎支原体P36基因片段的原核表达及鉴定 | 第33-46页 |
| 1 材料 | 第33-36页 |
| ·质粒和菌株 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33页 |
| ·仪器 | 第33页 |
| ·溶液及配制 | 第33-36页 |
| 2 方法 | 第36-41页 |
| ·引物的设计与合成 | 第36页 |
| ·模板的制备 | 第36页 |
| ·Mhp P36基因的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·Mhp P36基因的回收纯化 | 第37页 |
| ·Mhp P36基因与pMD18-T载体的连接 | 第37页 |
| ·连接产物的转化 | 第37-38页 |
| ·重组质粒DNA的提取、鉴定及测序 | 第38页 |
| ·原核表达载体pET-28a(+)P36的构建 | 第38-39页 |
| ·连接产物的转化、重组质粒DNA的提取及鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第40页 |
| ·最佳诱导条件的确定 | 第40页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| ·表达产物的Western-blot检测 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-45页 |
| ·猪肺炎支原体P36基因的扩增 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pMD18-T P36酶切产物的鉴定 | 第42页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)P36的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE结果 | 第43页 |
| ·重组蛋白的表达条件的优化 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白的纯化结果 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的Western-blot | 第45页 |
| 4 小结 | 第45-46页 |
| 讨论 | 第46-49页 |
| 1 猪肺炎支原体蛋白组学的研究动态 | 第46页 |
| 2 猪肺炎支原体168株双向电泳体系的建立 | 第46-48页 |
| 3 Mhp P36蛋白的研究进展 | 第48-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| Abstract | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
