| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-20页 |
| ·花色形成概述 | 第10-12页 |
| ·花瓣的组织结构与花色形成 | 第10-11页 |
| ·植物色素的种类 | 第11-12页 |
| ·类黄酮 | 第11页 |
| ·类胡萝卜素 | 第11页 |
| ·生物碱 | 第11-12页 |
| ·花色素与花色形成 | 第12页 |
| ·花色素苷的合成途径及相关基因的研究 | 第12-16页 |
| ·花色素苷的合成途径 | 第13-14页 |
| ·花色素苷合成相关的结构基因与调节基因的克隆 | 第14-16页 |
| ·花色苷合成途径中的结构基因的克隆 | 第14页 |
| ·花色苷合成途径中的调节基因的克隆 | 第14-16页 |
| ·植物基因克隆技术的研究 | 第16-18页 |
| ·根据已知基因的序列克隆植物基因 | 第17页 |
| ·利用植物基因的蛋白质产物克隆基因 | 第17页 |
| ·基因标签法 | 第17页 |
| ·cDNA 末端快速扩增法 | 第17-18页 |
| ·花色基因工程在植物花色育种上的应用 | 第18页 |
| ·石蒜属植物的研究概况 | 第18页 |
| ·存在的问题与展望 | 第18-19页 |
| ·影响花色的其他因素 | 第18-19页 |
| ·花色基因工程的不足 | 第19页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 第二章 石蒜花色素苷生物合成相关基因的克隆及序列分析 | 第20-51页 |
| ·试验材料 | 第20-21页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·菌株与载体 | 第20页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-28页 |
| ·石蒜总 RNA 的提取与检测 | 第21-22页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第21页 |
| ·总 RNA 的定量与完整性检测 | 第21-22页 |
| ·石蒜 CHI、FLS、F3H、DFR 和 ANS 基因中间片段的克隆 | 第22-26页 |
| ·反转录 cDNA 第一链的合成 | 第22页 |
| ·简并引物的设计 | 第22-23页 |
| ·目的基因中间片段的克隆 | 第23-24页 |
| ·目的片段的回收和纯化 | 第24页 |
| ·回收产物与载体的连接 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第24-25页 |
| ·目的基因的鉴定及测序 | 第25-26页 |
| ·石蒜 CHI、FLS、F3H、DFR 和 ANS 基因的 3’RACE 及 5’RACE 扩增 | 第26-27页 |
| ·反转录反应 | 第26页 |
| ·3’RACE 及 5’RACE 扩增 | 第26-27页 |
| ·3’端及 5’端序列的鉴定 | 第27页 |
| ·石蒜 CHI、FLS、F3H、DFR 和 ANS 基因 cDNA 全长序列的验证 | 第27页 |
| ·石蒜 CHI、FLS、F3H、DFR 和 ANS 基因的生物信息学分析 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-49页 |
| ·石蒜总 RNA 的提取 | 第28页 |
| ·石蒜 CHI、FLS、F3H、DFR 和 ANS 基因的克隆 | 第28-30页 |
| ·石蒜 CHI、FLS、F3H、DFR 和 ANS 基因的生物信息学分析 | 第30-49页 |
| ·LrCHI 的序列与生物信息学分析 | 第30-33页 |
| ·LrFLS 的序列与生物信息学分析 | 第33-37页 |
| ·LrF3H 的序列与生物信息学分析 | 第37-41页 |
| ·LrDFR 的序列与生物信息学分析 | 第41-45页 |
| ·LrANS 的序列与生物信息学分析 | 第45-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第三章 石蒜花色素苷生物合成相关基因的表达分析 | 第51-60页 |
| ·试验材料 | 第51页 |
| ·植物材料 | 第51页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-53页 |
| ·石蒜总 RNA 的提取 | 第51页 |
| ·cDNA 的合成 | 第51-52页 |
| ·实时荧光定量 RT-PCR | 第52-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-58页 |
| ·石蒜花色素苷合成相关基因在不同花发育时期的表达分析 | 第53-56页 |
| ·LrCHI 基因在不同花发育时期的表达分析 | 第53-54页 |
| ·LrFLS 基因在不同花发育时期的表达分析 | 第54页 |
| ·LrF3H 基因在不同花发育时期的表达分析 | 第54-55页 |
| ·LrDFR 基因在不同花发育时期的表达分析 | 第55页 |
| ·LrANS 基因在不同花发育时期的表达分析 | 第55-56页 |
| ·石蒜花色素苷合成相关基因的器官特异性表达分析 | 第56-58页 |
| ·LrCHI 基因的器官特异性表达分析 | 第56页 |
| ·LrFLS 基因的器官特异性表达分析 | 第56-57页 |
| ·LrF3H 基因的器官特异性表达分析 | 第57页 |
| ·LrDFR 基因的器官特异性表达分析 | 第57-58页 |
| ·LrANS 基因的器官特异性表达分析 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 LrF3H、LrDFR 和 LrANS 基因植物表达载体的构建 | 第60-69页 |
| ·试验材料 | 第60-61页 |
| ·菌株与载体 | 第60-61页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第61页 |
| ·主要仪器设备 | 第61页 |
| ·试验方法 | 第61-64页 |
| ·附有酶切位点的 LrF3H、LrDFR 和 LrANS 基因的全长扩增 | 第61页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第61-64页 |
| ·pCAMBIA13011-LrF3H 表达载体的构建 | 第62页 |
| ·pCAMBIA13011-LrDFR 表达载体的构建 | 第62-63页 |
| ·pCAMBIA13011-LrANS 表达载体的构建 | 第63-64页 |
| ·农杆菌工程菌的构建 | 第64页 |
| ·农杆菌 EHA105 感受态的制备 | 第64页 |
| ·电击法转化农杆菌 EHA105 | 第64页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第64页 |
| ·农杆菌菌液的保存 | 第64页 |
| ·结果与分析 | 第64-67页 |
| ·附有酶切位点的 LrF3H、LrDFR 和 LrANS 基因的全长扩增 | 第64-65页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第65-67页 |
| ·农杆菌工程菌的构建 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 第五章 结论 | 第69-70页 |
| ·主要研究成果 | 第69页 |
| ·今后研究的方向与目标 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 附录 | 第76-78页 |
| 个人简介 | 第78页 |
| 论文发表情况 | 第78页 |
| 学术交流活动 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
