| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 第一章 谷氨酰转移酶催化合成蘑菇氨酸类似物研究 | 第13-57页 |
| 第一节 文献综述 | 第13-27页 |
| ·谷氨酰转移酶概况 | 第15-16页 |
| ·谷氨酰转移酶催化作用 | 第16-17页 |
| ·Hammett方程 | 第17-19页 |
| ·γ-谷氨酰转移酶在生物催化中的应用 | 第19-22页 |
| ·重要的谷氨酰化合物——蘑菇氨酸 | 第22-27页 |
| 第二节 谷氨酰转移酶催化机理研究 | 第27-41页 |
| ·材料与方法 | 第28-33页 |
| ·材料和试剂 | 第28页 |
| ·主要实验仪器 | 第28-29页 |
| ·γ-谷氨酰苯胺类似物化学合成 | 第29-31页 |
| ·重组谷氨酰转移酶工程菌的培养及诱导表达 | 第31页 |
| ·谷氨酰转移酶分离纯化 | 第31-32页 |
| ·谷氨酰转移酶活性测定 | 第32页 |
| ·谷氨酰转移酶催化反应动力学研究 | 第32-33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-41页 |
| ·有关L-谷氨酰苯胺类似物合成 | 第33页 |
| ·茶氨酸浓度分析 | 第33-34页 |
| ·pH和温度对谷氨酰转移酶活性影响 | 第34-35页 |
| ·底物摩尔比对谷氨酰转移酶活性影响 | 第35-36页 |
| ·谷氨酰转移酶底物特异性及反应动力学研究 | 第36-41页 |
| ·结论 | 第41页 |
| 第三节 谷氨酰转移酶催化合成谷氨酰苯肼研究 | 第41-47页 |
| ·材料与方法 | 第42-44页 |
| ·试剂与仪器 | 第42页 |
| ·重组大肠杆菌谷氨酰转移酶构建与纯化 | 第42页 |
| ·谷氨酰转移酶的活性分析和产物浓度测定 | 第42-43页 |
| ·制备β-N-(γ-L(+)-谷氨酰基)苯肼 | 第43页 |
| ·测定苯肼抑制谷氨酰转移酶性质 | 第43-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-47页 |
| ·pH与温度对谷氨酰转移酶活性影响 | 第44页 |
| ·底物摩尔比对谷氨酰转移酶活性影响 | 第44-45页 |
| ·底物苯肼浓度对谷氨酰转移酶活性影响 | 第45-46页 |
| ·苯肼可逆性抑制谷氨酰转移酶 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第四节 谷氨酰转移酶催化合成谷氨酰对羧基苯肼研究 | 第47-54页 |
| ·材料与方法 | 第48-50页 |
| ·试剂与仪器 | 第48-49页 |
| ·重组大肠杆菌谷氨酰转移酶的构建与纯化 | 第49页 |
| ·谷氨酰转移酶的活性分析和产物浓度测定 | 第49页 |
| ·谷氨酰转移酶催化合成β-N-(γ-L(+)-谷氨酰基)-4-羧基苯肼 | 第49-50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-53页 |
| ·pH和温度对谷氨酰转移酶活性影响 | 第50-51页 |
| ·底物摩尔比和底物浓度对谷氨酰转移酶活性影响 | 第51-52页 |
| ·酶法合成β-N-(γ-L(+)-谷氨酰基)对羧基苯肼 | 第52-53页 |
| ·结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 第二章 天冬氨酸转氨酶催化合成手性胺及α-氨基酸研究 | 第57-99页 |
| 第一节 文献综述 | 第57-79页 |
| ·酶催化动力学拆分手性胺 | 第57-62页 |
| ·脂肪酶水解拆分手性胺 | 第57-60页 |
| ·转氨酶拆分手性胺 | 第60-62页 |
| ·酶催化的动态动力学拆分手性胺 | 第62-63页 |
| ·转氨酶不对称合成手性胺 | 第63-66页 |
| ·(S)-卡巴拉汀合成方法 | 第66-77页 |
| ·(S)-卡巴拉汀化学合成方法 | 第66-70页 |
| ·化学-酶法合成卡巴拉汀路径 | 第70-77页 |
| ·亮氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶联用催化转氨反应 | 第77-79页 |
| 第二节 芳基和烷基取代的α-酮酸化学合成 | 第79-89页 |
| ·材料与方法 | 第79-86页 |
| ·材料和试剂 | 第79页 |
| ·主要实验仪器 | 第79页 |
| ·化学法合成芳基取代α-酮酸 | 第79-83页 |
| ·化学法合成烷基取代α-酮酸 | 第83-86页 |
| ·实验讨论 | 第86-88页 |
| ·有关化学法合成芳基取代α-酮酸实验讨论 | 第87-88页 |
| ·有关化学法合成烷基取代α-酮酸实验讨论 | 第88页 |
| ·结论 | 第88-89页 |
| 第三节 天冬氨酸转氨酶催化合成α-氨基酸 | 第89-94页 |
| ·材料与方法 | 第89-90页 |
| ·材料和试剂 | 第89页 |
| ·主要实验仪器 | 第89页 |
| ·重组天冬氨酸转氨酶工程菌的培养及诱导表达 | 第89-90页 |
| ·酶法转化及酶活测定 | 第90页 |
| ·天冬氨酸转氨酶催化合成α-氨基酸路线 | 第90页 |
| ·结果与讨论 | 第90-94页 |
| ·芳基取代的α-酮酸转化结果与讨论 | 第90-92页 |
| ·烷基取代的α-酮酸转化结果与讨论 | 第92-94页 |
| ·结论 | 第94页 |
| 第四节 天冬氨酸转氨酶催化合成手性3-(1-氨基乙基)苯酚 | 第94-99页 |
| ·材料与方法 | 第94-95页 |
| ·材料和试剂 | 第94页 |
| ·主要实验仪器 | 第94-95页 |
| ·重组天冬氨酸转氨酶工程菌的培养及诱导表达 | 第95页 |
| ·酶法转化及酶活测定 | 第95页 |
| ·结果与讨论 | 第95-97页 |
| ·pH、温度、有机溶剂DMSO对酶活性影响 | 第95-96页 |
| ·DMSO的加入量对酶活性影响 | 第96-97页 |
| ·其他有机溶剂对天冬氨酸转氨酶催化活性影响 | 第97页 |
| ·底物间羟基苯乙酮浓度对酶活性影响 | 第97页 |
| ·结论 | 第97-99页 |
| 第三章 联用亮氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶催化合成α-氨基酸研究 | 第99-123页 |
| 第一节 亮氨酸脱氢酶基因工程菌构建 | 第100-107页 |
| ·主要实验材料 | 第100页 |
| ·主要实验试剂 | 第100页 |
| ·主要实验仪器 | 第100页 |
| ·培养基 | 第100页 |
| ·实验方法 | 第100-104页 |
| ·亮氨酸脱氢酶基因工程菌(pETDuet-leudh/E.coli BL21(DE3))构建 | 第100-103页 |
| ·亮氨酸脱氢酶基因工程菌诱导表达 | 第103-104页 |
| ·亮氨酸脱氢酶基因工程菌酶活性测定 | 第104页 |
| ·实验结果与讨论 | 第104-107页 |
| ·重组质粒pETDuet-leudh构建 | 第104-106页 |
| ·亮氨酸脱氢酶活性测定 | 第106-107页 |
| ·结论 | 第107页 |
| 第二节 甲酸脱氢酶基因工程菌构建 | 第107-115页 |
| ·主要实验材料 | 第107页 |
| ·实验方法 | 第107-111页 |
| ·甲酸脱氢酶基因工程菌(pETDuet-fdh/E.coli BL21(DE3))构建 | 第107-111页 |
| ·甲酸脱氢酶基因工程菌诱导表达 | 第111页 |
| ·甲酸脱氢酶基因工程菌酶活性测定 | 第111页 |
| ·实验结果与讨论 | 第111-115页 |
| ·重组质粒pETDuet-fdh构建 | 第111-114页 |
| ·甲酸脱氢酶活性测定 | 第114-115页 |
| ·结论 | 第115页 |
| 第三节 亮氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶联用催化合成α-氨基酸 | 第115-120页 |
| ·材料与方法 | 第116页 |
| ·材料和试剂 | 第116页 |
| ·主要实验仪器 | 第116页 |
| ·重组甲酸脱氢酶和亮氨酸脱氢酶工程菌的培养及诱导表达 | 第116页 |
| ·酶法转化及酶活测定 | 第116页 |
| ·双酶系统催化烷基取代α-酮酸结果与讨论 | 第116-119页 |
| ·pH、温度对酶活性影响 | 第116-118页 |
| ·NAD的加入量对酶活性影响 | 第118-119页 |
| ·双酶系统催化芳基取代α-酮酸结果与讨论 | 第119页 |
| ·结论 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-123页 |
| 总结 | 第123-124页 |
| 附图：部分氢谱图 | 第124-130页 |
| 攻读博士学位期间论文发表及相关情况 | 第130-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
