| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-26页 |
| ·合成生物学简介 | 第12-17页 |
| ·标准的Biobrick组成 | 第13页 |
| ·Biobrick的组装方法 | 第13-15页 |
| ·合成生物学应用范围及意义 | 第15-17页 |
| ·体外构建串联目标基因的策略 | 第17-22页 |
| ·构建串联基因的方法 | 第18-20页 |
| ·构建方法选择的依据 | 第20-21页 |
| ·多拷贝表达策略的意义及局限性 | 第21-22页 |
| ·解脂耶氏酵母表达系统 | 第22-25页 |
| ·表达菌株 | 第22-23页 |
| ·表达载体 | 第23-25页 |
| ·解脂耶氏酵母表达系统的特点 | 第25页 |
| ·本文的研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第26-43页 |
| ·材料与仪器 | 第26-31页 |
| ·菌株 | 第26页 |
| ·质粒 | 第26-27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·试剂和酶 | 第27-28页 |
| ·仪器和设备 | 第28页 |
| ·实验主要溶液的配制方法 | 第28-30页 |
| ·引物 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-43页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第31页 |
| ·琼脂糖凝胶回收纯化目的DNA片段 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的双酶切处理 | 第32页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌的常规转化及快速转化 | 第34页 |
| ·两种不同来源的甘露聚糖酶在解脂耶氏酵母中的表达 | 第34-37页 |
| ·SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第37-38页 |
| ·目的蛋白的质谱验证 | 第38-39页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第39-40页 |
| ·甘露聚糖酶酶活的测定方法 | 第40-41页 |
| ·什露聚糖酶酶学性质的测定 | 第41-43页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第43-68页 |
| ·解脂耶氏酵母表达载体PINAl296的改造及功能验证 | 第43-46页 |
| ·pINAl296I生物砖载体的构建 | 第43-45页 |
| ·验证pINAl296I载体上的限制性酶切位点 | 第45-46页 |
| ·验证pINAl296I载体的营养筛选标记LEU2 | 第46页 |
| ·来源于黑曲霉的甘露聚糖酶基因的克隆及表达 | 第46-54页 |
| ·man-A基因的克隆 | 第46-47页 |
| ·单拷贝man-A解脂耶氏酵母表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·单拷贝man-A解脂耶氏酵母的转化及转化子的鉴定 | 第48-49页 |
| ·单拷贝pINAl296I-man-A在解脂耶氏酵母中的表达 | 第49-50页 |
| ·单拷贝pINAl296I-man-A的EndoH处理 | 第50-51页 |
| ·单拷贝-六拷贝pINAl296I-man-A表达载体的构建及表达 | 第51-54页 |
| ·来源于枯草芽孢杆菌的甘露聚糖酶基因的克隆及表达 | 第54-62页 |
| ·man-B基因的克隆 | 第54-55页 |
| ·单拷贝man-B解脂耶氏酵母表达载体的构建 | 第55-57页 |
| ·单拷贝man-B解脂耶氏酵母的转化及转化子的鉴定 | 第57-58页 |
| ·单拷贝pINAl296I-man-B在解脂耶氏酵母中的表达 | 第58-59页 |
| ·两拷贝-六拷贝pINAl296I-man-B表达载体的构建及表达 | 第59-62页 |
| ·来源于黑曲霉的甘露聚糖酶酶学性质分析 | 第62-64页 |
| ·pH对man-A活性的影响 | 第62-63页 |
| ·温度对man-A活性的影响 | 第63-64页 |
| ·测定两种不同来源的1-6拷贝甘露聚糖酶蛋白浓度及酶活 | 第64-68页 |
| ·比较1-6拷贝的man-A蛋白浓度 | 第64-65页 |
| ·比较1-6拷贝的man-A酶活性 | 第65-66页 |
| ·比较1-6拷贝的man-B蛋白浓度 | 第66-67页 |
| ·比较1-6拷贝的man-B酶活性 | 第67-68页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| ·展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
