| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第一章 文献综述猪痘病毒研究进展 | 第12-23页 |
| ·概述 | 第12页 |
| ·病原学 | 第12-15页 |
| ·猪痘病毒的形态学及理化特性 | 第12-13页 |
| ·宿主特异性和细胞培养特性 | 第13页 |
| ·猪痘病毒的感染机制和形态发生学 | 第13-15页 |
| ·猪痘病毒的分子生物学特征 | 第15-17页 |
| ·猪痘病毒基因组结构 | 第15-16页 |
| ·猪痘病毒与痘苗病毒及其它痘病毒属比较 | 第16-17页 |
| ·猪痘病毒编码的主要囊膜蛋白及其功能 | 第17-19页 |
| ·P35蛋白 | 第17-18页 |
| ·A27L蛋白 | 第18页 |
| ·P42蛋白 | 第18-19页 |
| ·流行病学 | 第19页 |
| ·致病机理 | 第19页 |
| ·临床症状和病理变化 | 第19-20页 |
| ·临床症状 | 第19-20页 |
| ·病理变化 | 第20页 |
| ·诊断与防制 | 第20-21页 |
| ·猪痘病毒的检测 | 第20-21页 |
| ·猪痘病毒分离培养 | 第21页 |
| ·分子生物学方法 | 第21页 |
| ·防制 | 第21页 |
| ·猪痘病毒疫苗载体研究进展 | 第21-23页 |
| 第二章 猪痘病毒PCR检测方法的建立及应用 | 第23-34页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·引物设计与合成 | 第24页 |
| ·皮肤痘痂组织DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·PCR | 第25页 |
| ·PCR产物纯化(按试剂盒说明书操作) | 第25页 |
| ·P35基因的克隆 | 第25-28页 |
| ·P35基因与pEASY-T3载体的连接 | 第25-26页 |
| ·连接产物转化 | 第26页 |
| ·pEASY-T-P35重组质粒的鉴定 | 第26-28页 |
| ·PCR特异性、敏感性及重复性试验 | 第28页 |
| ·特异性试验 | 第28页 |
| ·敏感性实验 | 第28页 |
| ·重复性实验 | 第28页 |
| ·临床样品的检测 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-32页 |
| ·PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·重组质粒pEASY-T-P35的酶切鉴定 | 第29页 |
| ·P35基因测序 | 第29-31页 |
| ·特异性实验 | 第31页 |
| ·敏感性实验 | 第31页 |
| ·重复性实验 | 第31-32页 |
| ·临床样品的检测 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第三章 猪痘病毒江西株的分离鉴定 | 第34-45页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·病毒分离 | 第35-36页 |
| ·正常PK15细胞的培养 | 第35页 |
| ·病料及病料处理 | 第35页 |
| ·病毒感染细胞 | 第35-36页 |
| ·猪痘病毒感染细胞的病变观察及PCR鉴定 | 第36-37页 |
| ·观察细胞CPE | 第36页 |
| ·PCR方法检测培养细胞 | 第36-37页 |
| ·感染细胞的超薄切片 | 第37页 |
| ·人工感染兔和小鼠试验 | 第37页 |
| ·结果 | 第37-43页 |
| ·细胞CPE的观察 | 第37-38页 |
| ·PCR检测 | 第38-39页 |
| ·P35基因序列的分析与系统发育进化树分析 | 第39-41页 |
| ·超薄切片电镜观察 | 第41-42页 |
| ·分离毒株人工感染兔、小鼠结果 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43页 |
| ·小结 | 第43-45页 |
| 第四章 猪痘病毒P35基因的克隆表达 | 第45-60页 |
| ·材料 | 第45-48页 |
| ·引物设计 | 第48页 |
| ·重组表达质粒的构建与鉴定 | 第48-49页 |
| ·SWPV-JX01分离株P35基因的克隆与鉴定 | 第48页 |
| ·重组原核表达质粒pGEX-4T-P35的构建 | 第48-49页 |
| ·转化表达菌BL21(DE3)plys及鉴定 | 第49页 |
| ·重组菌诱导表达及表达条件的优化 | 第49-50页 |
| ·诱导表达 | 第49页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第49-50页 |
| ·诱导条件优化 | 第50页 |
| ·包涵体的纯化、复性 | 第50-53页 |
| ·诱导表达 | 第50-51页 |
| ·超声波裂解 | 第51页 |
| ·包涵体洗涤 | 第51页 |
| ·P35融合蛋白的纯化(按MagneGST蛋白纯化试剂盒说明书操作) | 第51-52页 |
| ·透析复性 | 第52-53页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第53页 |
| ·重组蛋白反应原性的检测 | 第53页 |
| ·重组蛋白免疫效果的检测 | 第53页 |
| ·重组蛋白GST-P35免疫BALB/c小鼠 | 第53页 |
| ·免疫小鼠血清间接ELISA检测 | 第53页 |
| ·结果 | 第53-58页 |
| ·SWPV-JX01 P35基因的原核表达质粒构建 | 第53-55页 |
| ·重组菌诱导表达及表达条件的优化 | 第55-57页 |
| ·超声波裂解产物SDS-PAGE | 第57页 |
| ·包涵体的纯化 | 第57页 |
| ·GST-P35蛋白浓度测定 | 第57-58页 |
| ·GST-P35蛋白反应原性的检测结果 | 第58页 |
| ·GST-P35蛋白免疫小鼠血清ELISA检测结果 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 第五章 间接ELISA方法的建立及江西省猪痘病毒血清学调查 | 第60-70页 |
| ·材料 | 第60-61页 |
| ·间接ELISA相关条件的确定 | 第61-62页 |
| ·反应条件的确定 | 第61页 |
| ·重复性实验 | 第61页 |
| ·间接ELISA抗体检测阴、阳性标准的确定 | 第61-62页 |
| ·江西省猪场猪痘病毒感染的血清学检测 | 第62页 |
| ·结果 | 第62-68页 |
| ·GST-P35蛋白包被液的选择 | 第62-63页 |
| ·GST-P35蛋白包被浓度与血清稀释度的确定 | 第63页 |
| ·酶标二抗稀释度的确定 | 第63-64页 |
| ·封闭液的选择 | 第64页 |
| ·重复性试验 | 第64页 |
| ·间接ELISA抗体检测阴、阳性标准的确定 | 第64-65页 |
| ·江西省规模化猪场猪痘病毒感染的血清学检测 | 第65-68页 |
| ·讨论 | 第68-69页 |
| ·P35蛋白的选择 | 第68页 |
| ·间接ELISA方法的初步应用 | 第68-69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 全文总结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 论文发表情况 | 第77页 |
