| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| ·甘蔗黄叶病(SCYLD)流行病学研究 | 第10-14页 |
| ·SCYLV的传播方式寄主 | 第11-12页 |
| ·甘蔗黄叶病病理学特征及其危害 | 第12-13页 |
| ·甘蔗黄叶病的检测 | 第13-14页 |
| ·甘蔗黄叶病毒(SCYLV) | 第14-16页 |
| ·SCYLV的分类地位 | 第14-15页 |
| ·SCYLV的基因组结构及编码产物 | 第15-16页 |
| ·PTGS和病毒编码的RNA沉默抑制子 | 第16-19页 |
| ·转录后基因沉默(PTGS) | 第16-17页 |
| ·病毒编码的RNA沉默抑制子 | 第17-19页 |
| ·本研究的立题依据 | 第19-20页 |
| ·目的及意义 | 第19-20页 |
| ·主要研究内容 | 第20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-38页 |
| ·材料 | 第21-24页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·宿主菌和载体 | 第21-23页 |
| ·酶和化学试剂 | 第23页 |
| ·数据来源 | 第23页 |
| ·分析软件 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-38页 |
| ·全基因组扩增引物的设计 | 第24页 |
| ·显症病样总RNA提取 | 第24-25页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第25页 |
| ·RT-PCR检测 | 第25-26页 |
| ·各部分序列PCR扩增及产物回收 | 第26-27页 |
| ·构建目的DNA片段的克隆载体 | 第27-28页 |
| ·SCYLV-HN1基因组生物信息学分析 | 第28页 |
| ·构建CP和PO元和表达载体的寡核苷酸引物 | 第28-29页 |
| ·构建重组克隆质粒pMD19T-CP和pMD19T-P0 | 第29-30页 |
| ·CP和PO的原核表达载体构建及鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组表达质粒pET32a-CP和pET32a-PO的诱导表达及分析 | 第31-33页 |
| ·构建CP和PO诱饵质粒的寡核苷酸引物 | 第33页 |
| ·CP和PO编码区PCR扩增及产物回收 | 第33-34页 |
| ·PCR产物及pBT载体酶切回收及产物连接 | 第34-35页 |
| ·超级感受态制备 | 第35页 |
| ·诱饵质粒pBT-CP和pBT-PO的构建及鉴定 | 第35-37页 |
| ·诱饵质粒pBT-SCYLV CP和pBT-SCYLV PO表达鉴定 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌双杂交系统诱饵质粒的自激活鉴定 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-52页 |
| ·SCYLV-HN1全基因组克隆及分析 | 第38-42页 |
| ·病样总RNA的提取 | 第38-39页 |
| ·病样RT-PCR检测 | 第39页 |
| ·基因组结构分析 | 第39-40页 |
| ·基因组系统进化分析 | 第40-42页 |
| ·CP和PO的原核表达 | 第42-46页 |
| ·CP和PO编码区PCR扩增 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-CP和pET32a(+)-PO双酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·pET32a(+)-CP和pET32a(+)-PO的DNA序列分析 | 第44-45页 |
| ·重组表达质粒pET32a-CP和pET32a-PO诱导表达 | 第45-46页 |
| ·CP和PO细菌双杂交诱饵质粒的构建及鉴定 | 第46-52页 |
| ·SCYLV CP和PO编码区PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·重组质粒pBT-SCYLV CP和pBT-SCYLV PO酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·诱饵质粒pBT-SCYLV CP和pBT-SCYLV PO的DNA序列分析 | 第48-49页 |
| ·诱饵质粒的表达鉴定和western blot分析 | 第49-51页 |
| ·诱饵质粒pBT-CP和pBT-PO自激活检测 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-57页 |
| ·SCYLV-HN1基因组克隆 | 第52-53页 |
| ·外源基因表达系统 | 第53-54页 |
| ·CP和PO基因表达产物鉴定 | 第54页 |
| ·细菌双杂交技术 | 第54-55页 |
| ·诱饵质粒的表达鉴定 | 第55-56页 |
| ·诱饵质粒的自激活鉴定 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 附录 | 第66-76页 |
| 附录A 缩略词 | 第66-67页 |
| 附录B 常用试剂、培养基及缓冲液配制 | 第67-70页 |
| 附录C SCYLV-HN1基因组序列 | 第70-74页 |
| 附录D SCYLV-HN1 CP基因和氨基酸序列 | 第74-75页 |
| 附录E SCYLV-HN1 PO基因和氨基酸序列 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
