| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词 | 第8-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| ·乙型病毒性肝炎 | 第13页 |
| ·融合 RNAi 技术的乙肝核酸疫苗 | 第13-21页 |
| ·HBV HLA 限制性抗原表位 | 第13-16页 |
| ·siRNA 及其组织特异性 | 第16-18页 |
| ·载体 | 第18-20页 |
| ·其它 | 第20-21页 |
| ·临床应用 | 第21-22页 |
| ·本论文的研究意义和技术路线 | 第22-25页 |
| ·本论文的研究意义 | 第22-23页 |
| ·本论文的技术路线 | 第23-25页 |
| 第二章 siRNA 表达单元设计及 pAAV-siHBsAg 的构建 | 第25-37页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·质粒和菌株 | 第25页 |
| ·主要药品与试剂 | 第25-26页 |
| ·主要设备与仪器 | 第26-27页 |
| ·溶液配制 | 第27-29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·完整 siRNA 表达单元的构建 | 第29-32页 |
| ·pAAV-MCS 质粒和 siRNA 表达单元 PCR 扩增产物的酶切 | 第32页 |
| ·pAAV-MCS 和 siRNA 表达单元酶切产物的连接 | 第32页 |
| ·重组质粒的转化与筛选 | 第32-34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-35页 |
| ·重组质粒 pAAV-siHBsAg 的 PCR 和酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒 pAAV-siHBsAg 测序鉴定 | 第35页 |
| ·小结 | 第35-37页 |
| 第三章 pAAV-siHBsAg 对 HepG22.2.15 细胞内 HBsAg 抑制效果检测 | 第37-44页 |
| ·实验材料 | 第37-39页 |
| ·质粒和细胞系 | 第37页 |
| ·主要药品与试剂 | 第37-38页 |
| ·主要设备与仪器 | 第38页 |
| ·溶液配制 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-41页 |
| ·细胞的培养 | 第39-40页 |
| ·细胞生长曲线 | 第40页 |
| ·ELISA 检测质粒介导的 siRNA 抑制效果 | 第40-41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-43页 |
| ·HepG22.2.15 细胞生长曲线 | 第41-42页 |
| ·质粒介导的组织特异性 siRNA 抑制 HBsAg 结果 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第四章 特异性表达 siRNA 乙肝多表位 rAAV 载体的构建 | 第44-50页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·质粒和细胞 | 第44页 |
| ·主要药品和试剂 | 第44页 |
| ·溶液配制 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-48页 |
| ·多表位抗原基因的设计 | 第44-45页 |
| ·HB-EGFP 序列的扩增 | 第45-46页 |
| ·pAAV-siHBsAg 质粒和 HB-EGFP 表达单位 PCR 扩增产物的酶切 | 第46-47页 |
| ·pAAV-siHBsAg 和 HB-EGFP 酶切产物的连接 | 第47页 |
| ·重组质粒的转化 | 第47-48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-49页 |
| ·重组质粒 pAAV-siHBsAg-HE 的 PCR 和酶切鉴定 | 第48页 |
| ·重组腺相关病毒载体的测序结果 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第五章 AAV 病毒的组装及其介导的 siRNA 对 HBsAg 抑制效果和 HB 基因表达效果检测 | 第50-66页 |
| ·实验材料 | 第50-53页 |
| ·质粒和细胞 | 第50页 |
| ·主要药品和试剂 | 第50页 |
| ·主要设备与仪器 | 第50-51页 |
| ·溶液配制 | 第51-52页 |
| ·层析柱的装柱 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-58页 |
| ·AAV 病毒的组装 | 第53-56页 |
| ·AAV 腺相关病毒收集 | 第56页 |
| ·AAV 腺相关病毒收集液的纯化 | 第56-57页 |
| ·AAV 滴度的测定 | 第57-58页 |
| ·ELISA 检测病毒介导的组织特异性 siRNA 抑制效果 | 第58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-64页 |
| ·质粒的纯化结果 | 第58-60页 |
| ·重组病毒的组装结果 | 第60页 |
| ·重组病毒的纯化结果 | 第60-61页 |
| ·荧光显微镜检测 HB-EGFP 融合蛋白基因在宿主细胞里的表达 | 第61-62页 |
| ·重组腺相关病毒的滴度检测 | 第62-63页 |
| ·病毒介导的组织特异性 siRNA 抑制 HBsAg 结果 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-66页 |
| 结论与展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 附录 | 第72-74页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 附件 | 第76页 |
