曲霉CJ22-326产壳聚糖酶基因的克隆、表达与定点突变
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-21页 |
| ·目的意义 | 第10-11页 |
| ·壳聚糖酶的国内外研究现状与进展 | 第11-19页 |
| ·壳聚糖酶的性质 | 第11页 |
| ·壳聚糖酶的分子生物学研究 | 第11-19页 |
| ·目前壳聚糖酶研究尚存在的主要问题 | 第19页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 内切型壳聚糖酶基因的克隆与表达 | 第21-44页 |
| ·前言 | 第21页 |
| ·材料和方法 | 第21-28页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·实验方法 | 第23-28页 |
| ·结果 | 第28-41页 |
| ·CJ22-326 的分子生物学鉴定 | 第28-30页 |
| ·曲霉CJ22-326 的RNA 提取 | 第30页 |
| ·3’-RACE 和5’-RACE 扩增 | 第30-31页 |
| ·内切壳聚糖酶编码基因的扩增 | 第31-32页 |
| ·重组酶与其它真菌壳聚糖酶氨基酸序列的比较 | 第32页 |
| ·内切壳聚糖酶氨基酸序列的进化分析 | 第32-34页 |
| ·内切壳聚糖酶基因表达载体的鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组壳聚糖酶的表达与纯化 | 第35-38页 |
| ·重组内切酶的性质 | 第38-41页 |
| ·讨论 | 第41-44页 |
| 第三章 外切壳聚糖水解酶的基因克隆与表达 | 第44-57页 |
| ·前言 | 第44页 |
| ·材料和方法 | 第44-47页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-47页 |
| ·结果 | 第47-55页 |
| ·反转录及PCR 扩增 | 第47页 |
| ·外切酶基因的扩增 | 第47-48页 |
| ·表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·外切壳聚糖酶的进化树分析 | 第49-50页 |
| ·重组壳聚糖酶的诱导表达和鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组外切酶的纯化 | 第51-52页 |
| ·重组外切酶的性质 | 第52-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 内切壳聚糖酶基因的定点突变研究 | 第57-65页 |
| ·前言 | 第57页 |
| ·材料和方法 | 第57-59页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·试验方法 | 第58-59页 |
| ·结果 | 第59-62页 |
| ·定点突变策略 | 第59-60页 |
| ·突变体菌株的生长曲线 | 第60-61页 |
| ·定点突变前后的酶活力变化 | 第61页 |
| ·圆二色谱 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| ·定点突变策略 | 第62-63页 |
| ·维持内切型壳聚糖酶催化活力的必需氨基酸 | 第63-64页 |
| ·本章小结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-81页 |
| 论文主要结论 | 第81-82页 |
| 论文创新点 | 第82-83页 |
| 在校发表论文清单 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
