| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-18页 |
| 第1章 绪论 | 第18-45页 |
| ·课题研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| ·国内外研究进展 | 第19-43页 |
| ·粮食危机与植物病害 | 第19-21页 |
| ·木霉在植物病害生物防治中的应用 | 第21-26页 |
| ·几丁质酶研究进展 | 第26-35页 |
| ·噻唑生物合成酶研究进展 | 第35-41页 |
| ·根癌农杆菌介导的丝状真菌遗传转化 | 第41-43页 |
| ·目前研究中存在的问题 | 第43页 |
| ·课题来源与主要研究内容 | 第43-45页 |
| ·课题来源 | 第43-44页 |
| ·主要研究内容 | 第44-45页 |
| 第2章 材料与方法 | 第45-66页 |
| ·实验材料 | 第45-50页 |
| ·菌株和质粒 | 第45-46页 |
| ·培养基 | 第46-48页 |
| ·酶和试剂 | 第48-50页 |
| ·仪器设备 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-66页 |
| ·目的基因克隆与序列分析 | 第50-52页 |
| ·重组质粒的转化与鉴定 | 第52-54页 |
| ·原核表达载体构建与鉴定 | 第54-55页 |
| ·诱导表达条件优化与蛋白纯化 | 第55-56页 |
| ·酿酒酵母表达载体构建 | 第56-58页 |
| ·酿酒酵母转化子分子检测 | 第58-60页 |
| ·酿酒酵母转化子酶学特性 | 第60-62页 |
| ·真菌表达载体构建与哈茨木霉遗传转化 | 第62-63页 |
| ·哈茨木霉转化子的分子检测 | 第63-65页 |
| ·哈茨木霉转化子遗传稳定性及抑菌活性 | 第65-66页 |
| 第3章 几丁质酶基因Chit37 序列分析与原核表达 | 第66-81页 |
| ·基因Chit37 的序列分析 | 第66-73页 |
| ·基因Chit37 全长cDNA 序列的获得 | 第66页 |
| ·基因Chit37 序列同源性比较与保守区预测 | 第66页 |
| ·CHIT37 基本性质分析 | 第66-68页 |
| ·CHIT37 信号肽预测 | 第68-70页 |
| ·CHIT37 多序列比对 | 第70页 |
| ·CHIT37 氨基酸结构域预测 | 第70页 |
| ·CHIT37 系统进化树的构建 | 第70-73页 |
| ·几丁质酶基因Chit37 的原核表达 | 第73-78页 |
| ·基因Chit37 的PCR 扩增结果 | 第73-74页 |
| ·基因Chit37 原核表达载体构建 | 第74-75页 |
| ·重组质粒的菌落PCR 鉴定 | 第75页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第75页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第75-76页 |
| ·CHIT37 诱导表达条件优化 | 第76-77页 |
| ·CHIT37 的纯化 | 第77-78页 |
| ·关于基因Chit37 的序列分析与原核表达的讨论 | 第78-80页 |
| ·全长cDNA 序列获取方法的选择 | 第78页 |
| ·几丁质酶基因DNA 测序及分析递交 | 第78-79页 |
| ·几丁质酶基因和推导氨基酸序列的生物信息学分析 | 第79页 |
| ·基因原核表达中存在的问题 | 第79-80页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第80页 |
| ·本章小结 | 第80-81页 |
| 第4章 几丁质酶基因Chit37 酵母表达 | 第81-99页 |
| ·用于酿酒酵母表达的基因片段获得 | 第81页 |
| ·酿酒酵母表达载体构建 | 第81页 |
| ·酿酒酵母的生长曲线 | 第81-83页 |
| ·酵母转化子的筛选与鉴定 | 第83-86页 |
| ·酵母转化子的筛选 | 第83-84页 |
| ·酵母转化子菌落PCR 鉴定 | 第84-85页 |
| ·酵母转化子酶切鉴定 | 第85-86页 |
| ·酵母转化子的分子检测 | 第86-87页 |
| ·酵母总RNA 提取 | 第86页 |
| ·基因Chit37 诱导表达差异分析 | 第86-87页 |
| ·酵母转化子的Northern 杂交 | 第87页 |
| ·酿酒酵母转化子诱导表达 | 第87-88页 |
| ·酿酒酵母转化子的酶学特性 | 第88-93页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第88-89页 |
| ·酿酒酵母转化子的最佳培养时间测定 | 第89-90页 |
| ·重组几丁质酶最适反应温度测定 | 第90页 |
| ·重组几丁质酶最适pH 值测定 | 第90-91页 |
| ·重组几丁质酶最适底物浓度测定 | 第91-93页 |
| ·关于酿酒酵母转化子的表达、检测与酶学特性的讨论 | 第93-98页 |
| ·酿酒酵母表达载体的选择 | 第93页 |
| ·真核细胞中重组蛋白的表达 | 第93-94页 |
| ·目的基因的转化及酵母转化子的鉴定 | 第94页 |
| ·酿酒酵母转化的影响因素 | 第94-96页 |
| ·酿酒酵母RNA 提取 | 第96页 |
| ·酿酒酵母转化子分子检测的方法 | 第96-97页 |
| ·关于几丁质酶基因表达和酶活检测的讨论 | 第97页 |
| ·微生物产几丁质酶的影响条件 | 第97-98页 |
| ·本章小结 | 第98-99页 |
| 第5章 农杆菌介导Chit37 在哈茨木霉中的转化 | 第99-110页 |
| ·表达载体pPKPCT 的构建 | 第99-105页 |
| ·中间载体pUC-T 的构建 | 第99-101页 |
| ·中间载体pUC18-TP 的构建与鉴定 | 第101-102页 |
| ·中间载体pUC18-TPC 的构建与鉴定 | 第102页 |
| ·表达载体pPKPCT 的构建与鉴定 | 第102-104页 |
| ·重组质粒pPKPCT 转化根癌农杆菌AGL-1 | 第104-105页 |
| ·农杆菌介导的哈茨木霉遗传转化 | 第105-108页 |
| ·哈茨木霉转化子的获得与鉴定 | 第105页 |
| ·哈茨木霉转化子的Southern 杂交 | 第105-106页 |
| ·哈茨木霉转化子遗传稳定性检测 | 第106页 |
| ·哈茨木霉转化子与病原菌室内拮抗试验 | 第106-108页 |
| ·关于真菌遗传转化的讨论 | 第108-109页 |
| ·本章小结 | 第109-110页 |
| 第6章 噻唑生物合成酶基因Thi4 克隆与表达 | 第110-128页 |
| ·噻唑生物合成酶基因Thi4 的克隆及序列分析 | 第110-117页 |
| ·基因Thi4 的克隆 | 第110页 |
| ·THI4 氨基酸序列同源性比较及保守性分析 | 第110页 |
| ·THI4 氨基酸组成分析 | 第110-113页 |
| ·THI4 疏水性分析及跨膜结构预测 | 第113页 |
| ·THI4 二级结构预测 | 第113-114页 |
| ·THI4 三级结构预测 | 第114-115页 |
| ·THI4 氨基酸功能位点预测 | 第115-116页 |
| ·THI4 多序列比对 | 第116-117页 |
| ·THI4 系统进化树的构建 | 第117页 |
| ·噻唑生物合成酶基因Thi4 的原核表达 | 第117-121页 |
| ·基因Thi4 的PCR 扩增结果 | 第117-118页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第118页 |
| ·重组质粒菌落PCR 鉴定 | 第118页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定与测序鉴定 | 第118-120页 |
| ·诱导表达条件优化 | 第120-121页 |
| ·噻唑生物合成酶基因Thi4 的酵母表达 | 第121-126页 |
| ·用于酿酒酵母表达的基因片段获得 | 第121页 |
| ·酿酒酵母表达载体构建与鉴定 | 第121-123页 |
| ·酵母转化子菌落PCR 鉴定 | 第123页 |
| ·酵母转化子酶切鉴定 | 第123-124页 |
| ·酵母转化子Northern 杂交 | 第124-126页 |
| ·关于噻唑生物合成酶基因表达的讨论 | 第126-127页 |
| ·SDS-PAGE 分析中出现的问题 | 第126页 |
| ·噻唑生物合成酶的功能验证问题 | 第126-127页 |
| ·本章小结 | 第127-128页 |
| 结论 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-143页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第143-145页 |
| 致谢 | 第145-147页 |
| 个人简历 | 第147页 |
