摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-14页 |
第一章 绪论 | 第14-26页 |
·猪流感病毒概况 | 第14-19页 |
·猪流感的流行病学 | 第14-15页 |
·猪流感的生物学特性 | 第15-16页 |
·猪流感病毒基因结构与编码蛋白 | 第16-18页 |
·流感病毒的复制 | 第18-19页 |
·猪流感病毒种间传播及其分子机理 | 第19-20页 |
·猪流感病毒的种间传播 | 第19-20页 |
·猪流感病毒种间传播的分子机理 | 第20页 |
·猪流感病毒的遗传变异 | 第20-22页 |
·猪流感病毒抗原性变异 | 第20-21页 |
·猪流感病毒基因组变异 | 第21-22页 |
·猪流感病毒诊断技术研究进展 | 第22-23页 |
·猪流感病毒分离 | 第22页 |
·琼脂扩散(AGP)实验 | 第22页 |
·血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验 | 第22页 |
·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第22-23页 |
·荧光抗体试验(IF)试验 | 第23页 |
·免疫组织化学试验 | 第23页 |
·PCR 试验 | 第23页 |
·流感病毒单克隆抗体研究进展 | 第23-25页 |
·研究的目的和意义 | 第25-26页 |
第二章 H3N2 亚型猪流感病毒血凝素基因的原核表达 | 第26-35页 |
·材料 | 第26页 |
·病毒与菌种 | 第26页 |
·质粒及相关试剂 | 第26页 |
·方法 | 第26-31页 |
·引物 | 第26页 |
·病毒RNA 的提取及反转录 | 第26-27页 |
·PCR 反应扩增目的基因 | 第27页 |
·PCR 产物回收和纯化 | 第27-28页 |
·大肠杆菌感受态的制备 | 第28页 |
·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第28-29页 |
·转化菌的诱导表达及最佳诱导条件的确定 | 第29页 |
·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第29-30页 |
·表达产物的Western-blot 检测 | 第30页 |
·表达产物的纯化 | 第30-31页 |
·结果 | 第31-34页 |
·HA1 基因的RT-PCR 扩增结果 | 第31-32页 |
·重组表达质粒的鉴定结果 | 第32页 |
·转化菌的诱导表达 | 第32-34页 |
·讨论 | 第34-35页 |
第三章 H3N2 亚型 SIV 重组 HA1 蛋白间接 ELISA 检测方法的建立 | 第35-51页 |
·材料 | 第35页 |
·抗原 | 第35页 |
·血清和酶标抗体 | 第35页 |
·ELISA 相关溶液 | 第35页 |
·主要仪器和设备 | 第35页 |
·方法 | 第35-38页 |
·间接ELISA 操作步骤 | 第35-36页 |
·抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第36页 |
·封闭液对比试验 | 第36-37页 |
·封闭时间对比试验 | 第37页 |
·一抗最佳作用时间确定试验 | 第37页 |
·酶标抗体稀释倍数的确定 | 第37页 |
·酶标抗体作用时间的确定 | 第37页 |
·阴阳性标准对照的确定 | 第37页 |
·敏感性试验 | 第37页 |
·特异性试验 | 第37-38页 |
·重复性实验 | 第38页 |
·结果 | 第38-49页 |
·抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第38-39页 |
·封闭液对比试验 | 第39-40页 |
·封闭时间对比试验 | 第40-41页 |
·一抗最佳作用时间确定试验 | 第41-42页 |
·酶标抗体稀释倍数 | 第42-43页 |
·酶标抗体作用时间的确定 | 第43-45页 |
·阴阳性标准对照的确定 | 第45-46页 |
·敏感性试验 | 第46页 |
·特异性试验 | 第46页 |
·重复性试验 | 第46-49页 |
·讨论 | 第49-51页 |
第四章 猪流感病毒 H3N2 亚型单克隆抗体的制备 | 第51-62页 |
·材料 | 第51-52页 |
·毒株 | 第51页 |
·实验动物与细胞 | 第51页 |
·主要试剂 | 第51-52页 |
·主要仪器 | 第52页 |
·方法 | 第52-55页 |
·全病毒抗原的制备与纯化 | 第52页 |
·动物免疫 | 第52页 |
·间接ELISA 检测方法的建立 | 第52-53页 |
·饲养细胞的制备 | 第53页 |
·脾细胞制备 | 第53页 |
·细胞融合 | 第53-54页 |
·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第54页 |
·腹水的制备 | 第54页 |
·单克隆抗体的生物学特性鉴定 | 第54-55页 |
·结果 | 第55-61页 |
·全病毒抗原的制备与纯化 | 第55页 |
·动物免疫 | 第55-56页 |
·间接ELISA 检测方法的建立 | 第56-57页 |
·细胞融合 | 第57页 |
·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第57-58页 |
·腹水的制备 | 第58页 |
·单抗的生物学特性鉴定 | 第58-61页 |
·讨论 | 第61-62页 |
·抗原的纯化 | 第61页 |
·细胞融合 | 第61页 |
·筛选方法与生物学特性分析 | 第61-62页 |
第五章 结论 | 第62-63页 |
参考文献 | 第63-70页 |
附录 | 第70-71页 |
致谢 | 第71-72页 |
作者简历 | 第72页 |