| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-17页 |
| 1 柿果贮藏技术研究进展 | 第10-11页 |
| 2 乙烯与果实的成熟衰老 | 第11页 |
| 3 乙烯生物合成 | 第11-14页 |
| ·乙烯生物合成途径 | 第11页 |
| ·ACC合成酶基因 | 第11-12页 |
| ·ACC氧化酶基因 | 第12页 |
| ·乙烯受体基因 | 第12-14页 |
| ·乙烯受体基因家族的表达 | 第14页 |
| 4 乙烯信号转导研究进展 | 第14-15页 |
| 5 调控果实成熟的基因工程研究——RNA干扰技术 | 第15-16页 |
| 6 本研究的目的意义 | 第16-17页 |
| 第二章 上西早生柿ETR5基因cDNA片段的克隆 | 第17-30页 |
| 1 材料与试剂 | 第17-18页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·菌株和载体 | 第17页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·主要试剂溶液的配制 | 第18页 |
| 2 试验方法 | 第18-23页 |
| ·柿组培苗叶片中总RNA的提取及其浓度的检测 | 第18-19页 |
| ·mRNA的反转录 | 第19-20页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第20页 |
| ·目的扩增片段的回收 | 第20-21页 |
| ·目的片段与T载体连接 | 第21页 |
| ·连接产物的转化 | 第21-22页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第22-23页 |
| ·阳性克隆的序列测定及其同源性分析 | 第23页 |
| ·上西早生ETR5基因序列的提交 | 第23页 |
| 3 结果与分析 | 第23-30页 |
| ·上西早生柿组培苗叶片中RNA的提取质量 | 第23-24页 |
| ·RT-PCR反应条件的优化及其产物的电泳检测 | 第24-27页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定 | 第27页 |
| ·阳性克隆的序列测定及同源性分析 | 第27-29页 |
| ·上西早生柿乙烯受体ETR5的提交结果 | 第29-30页 |
| 第三章 基因片断法构建上西早生柿ETR5基因植物表达载体及农杆菌的转化 | 第30-42页 |
| 1 材料与试剂 | 第30-31页 |
| ·菌株和表达载体 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器与设备 | 第30页 |
| ·主要试剂及培养基的配制 | 第30-31页 |
| 2 方法 | 第31-37页 |
| ·上西早生柿ETR5基因植物表达载体的构建流程图 | 第31页 |
| ·正反义基因片段的引物设计 | 第31-32页 |
| ·正反义片段的PCR扩增 | 第32页 |
| ·正反义片段的回收 | 第32页 |
| ·正反义片段的连接 | 第32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第32页 |
| ·正反义片断的连接 | 第32-34页 |
| ·目的基因片段和质粒载体的双酶切 | 第34-35页 |
| ·目的片段与质粒载体连接 | 第35-36页 |
| ·构建好的植物表达载体向农杆菌中转化 | 第36-37页 |
| ·农杆菌中表达载体遗传稳定性的鉴定 | 第37页 |
| 3.结果与分析 | 第37-42页 |
| ·柿果ETR-5基因正反义片段的扩增及连接 | 第37-39页 |
| ·柿果ETR-5基因RNAi植物表达载体的鉴定 | 第39-40页 |
| ·农杆菌中表达载体的菌液PCR鉴定 | 第40-41页 |
| ·农杆菌中表达载体的遗传稳定性 | 第41-42页 |
| 第四章 讨论 | 第42-45页 |
| 1 上西早生柿ETR5基因cDNA片段的克隆 | 第42-43页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·温度设置 | 第42-43页 |
| ·Mg~(2+)离子浓度选择 | 第43页 |
| 2 关于表达载体的构建 | 第43-45页 |
| ·载体的选择 | 第43页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第43页 |
| ·限制性内切酶的使用 | 第43-44页 |
| ·连接片段的浓度比 | 第44-45页 |
| 第五章 结论 | 第45-46页 |
| 第六章 参考文献 | 第46-51页 |
| 作者简介 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-58页 |