NDV-F的原核表达及其免疫反应性和鸡Ii链与MHCⅡ的真核共表达
| 中文摘要一 | 第1-5页 |
| Abstract Ⅰ | 第5-7页 |
| 中文摘要二 | 第7-8页 |
| Abstract Ⅱ | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 图表目录 | 第13-14页 |
| 本论文常用缩写词 | 第14-15页 |
| 第一部分 NDV-F的原核表达及其免疫反应性 | 第15-57页 |
| 文献综述 | 第15-21页 |
| 引言 | 第21-23页 |
| 1 材料与方法 | 第23-38页 |
| ·NDV-F基因片段重组质粒构建实验材料 | 第23-24页 |
| ·工程菌和质粒 | 第23页 |
| ·酶类及主要试剂盒 | 第23页 |
| ·主要培养基与溶液的配制 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·引物合成 | 第24页 |
| ·NDV-F基因片段重组质粒的原核表达实验材料 | 第24-26页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·溶液配置 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·抗新城疫多抗的制备实验材料 | 第26-27页 |
| ·实验动物与鸡胚 | 第26页 |
| ·NDV F48E9毒株 | 第26页 |
| ·1%红细胞悬液的配制 | 第26-27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·小鼠免疫常用试剂 | 第27页 |
| ·主要器材 | 第27页 |
| ·重组蛋白的免疫学活性检测实验材料 | 第27-28页 |
| ·实验动物和材料 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·主要器材 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-38页 |
| ·鸡NDV-F基因片段重组质粒构建的实验方法 | 第28-32页 |
| ·NDV-F基因片段重组质粒原核表达的实验方法 | 第32-35页 |
| ·抗新城疫多抗制备的实验方法 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的免疫学活性检测实验方法 | 第36-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-47页 |
| ·NDV-F基因片段的扩增与单酶切鉴定 | 第38页 |
| ·编码NDV-F基因片段的克隆与序列测定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒插入片段的序列测定 | 第38页 |
| ·重组质粒插入片段的序列分析 | 第38-39页 |
| ·pGEX-4T-1-F重组质粒的构建与鉴定 | 第39-47页 |
| ·PCR鉴定 | 第39-41页 |
| ·酶切鉴定 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE检测诱导表达的融合蛋白 | 第41-42页 |
| ·诱导表达的条件优化 | 第42-43页 |
| ·融合蛋白的可溶性鉴定 | 第43-44页 |
| ·GST-F融合蛋白含量的测定 | 第44页 |
| ·病毒的复制与纯化 | 第44-46页 |
| ·Western-blot检测结果 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-53页 |
| ·PCR扩增鸡NDV-F基因 | 第47-48页 |
| ·宿主细胞及表达载体的选择 | 第48-49页 |
| ·原核表达重组载体的构建及鉴定 | 第49页 |
| ·鸡NDV-F基因片段的原核表达 | 第49-50页 |
| ·GST-F融合蛋白的大量提取 | 第50-53页 |
| ·含包涵体细菌的裂解 | 第50-51页 |
| ·包涵体的洗涤和溶解 | 第51页 |
| ·融合蛋白的复性 | 第51-53页 |
| 4 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 第二部分 鸡Ⅰi链与MHC Ⅱ的真核共表达 | 第57-79页 |
| 文献综述 | 第57-62页 |
| 引言 | 第62-63页 |
| 1 材料与方法 | 第63-67页 |
| ·实验材料 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63-67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-74页 |
| ·重组质粒的构建与鉴定 | 第67-71页 |
| ·荧光定位检测 | 第71-73页 |
| ·Wlestern blot检测 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-76页 |
| 4 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 附录 | 第80-81页 |
| 作者简介 | 第81页 |
