| 摘要 | 第1-6页 |
| Summary | 第6-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-28页 |
| 1 口蹄疫 | 第11页 |
| 2 口蹄疫病毒及其基因组结构和功能 | 第11-15页 |
| ·口蹄疫病毒 | 第11-12页 |
| ·口蹄疫病毒的基因组结构和功能 | 第12-15页 |
| ·5'-UTR 和3'- UTR 的结构和功能 | 第12-13页 |
| ·ORF 的结构和功能 | 第13-15页 |
| 3 口蹄疫病毒基因工程疫苗的研究进展 | 第15-28页 |
| ·亚单位疫苗 | 第16-17页 |
| ·转基因植物疫苗 | 第17-18页 |
| ·基因缺失疫苗 | 第18-19页 |
| ·合成肽疫苗 | 第19-20页 |
| ·蛋白质载体疫苗 | 第20页 |
| ·活载体疫苗 | 第20-26页 |
| ·痘病毒载体 | 第21-22页 |
| ·腺病毒载体 | 第22-24页 |
| ·疱疹病毒载体 | 第24页 |
| ·其他病毒载体 | 第24-25页 |
| ·重组载体细菌活疫苗 | 第25-26页 |
| ·核酸疫苗 | 第26-28页 |
| 第二部分 研究报告 | 第28-59页 |
| 第一章 A 型口蹄疫病毒多基因腺病毒穿梭质粒的构建 | 第28-41页 |
| 1 材料与方法 | 第29-37页 |
| ·质粒和菌株 | 第29-30页 |
| ·主要试剂和酶 | 第30页 |
| ·引物设计与合成 | 第30页 |
| ·A 型口蹄疫病毒P12A、3ABC、3C 目的基因的PCR 扩增 | 第30-31页 |
| ·片段的克隆与鉴定 | 第31-34页 |
| ·PCR 产物的纯化与回收 | 第31-32页 |
| ·目的基因与pGEM-T Easy 载体的连接 | 第32页 |
| ·感受态细胞的制备（在严格无菌条件下进行） | 第32-33页 |
| ·转化 | 第33页 |
| ·挑斑 | 第33页 |
| ·重组质粒的提取 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·腺病毒穿梭载体的构建 | 第34-37页 |
| ·P1-2A 和3C 或3ABC 片段插入穿梭载体 | 第34-35页 |
| ·转化感受态细胞 | 第35-36页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第36页 |
| ·重组腺病毒穿梭载体的鉴定 | 第36-37页 |
| 2 结果 | 第37-39页 |
| ·T-P1、T-3C、T-3ABC 质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·T-P1、T-3C、T-3ABC 质粒的PCR 鉴定 | 第37页 |
| ·T-P1、T-3C、T-3ABC 质粒的酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组腺病毒穿梭载体的PCR 和酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·穿梭质粒的测序鉴定 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 第二章 体外连接法构建A 型口蹄疫病毒多基因重组腺病毒载体 | 第41-48页 |
| 1 材料与方法 | 第42-46页 |
| ·菌株和质粒 | 第42页 |
| ·主要试剂和酶 | 第42页 |
| ·体外连接法构建重组腺病毒质粒 | 第42-45页 |
| ·酶切重组的穿梭质粒 | 第42-43页 |
| ·构建重组腺病毒质粒 | 第43-45页 |
| ·重组腺病毒质粒的大量制备 | 第45-46页 |
| 2 结果 | 第46-47页 |
| ·重组腺病毒质粒的PCR 鉴定 | 第46页 |
| ·重组腺病毒质粒的酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组腺病毒质粒的测序结果 | 第47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 第三章 重组腺病毒质粒转染HEK293 细胞产生重组腺病毒 | 第48-58页 |
| 1 材料与方法 | 第49-52页 |
| ·细胞 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·培养液 | 第49页 |
| ·293 细胞的培养 | 第49页 |
| ·脂质体介导的转染 | 第49-50页 |
| ·病毒的传代培养 | 第50页 |
| ·重组腺病毒的PCR 鉴定 | 第50-51页 |
| ·荧光抗体检测目的基因的表达 | 第51页 |
| ·双抗体夹心检测目的基因的表达 | 第51-52页 |
| ·重组腺病毒的电镜观察 | 第52页 |
| ·重组病毒的毒价测定 | 第52页 |
| 2 结果 | 第52-56页 |
| ·重组腺病毒质粒转染HEK293 细胞 | 第52-53页 |
| ·PCR 检测重组病毒 | 第53页 |
| ·间接荧光抗体法检测目的基因的表达 | 第53-54页 |
| ·双抗体夹心ELISA 检测目的基因的表达 | 第54页 |
| ·电镜观察结果 | 第54-55页 |
| ·重组病毒的效价滴定 | 第55-56页 |
| ·A-P12A3ABC 的病毒滴度 | 第55页 |
| ·A-P12A3C 的病毒 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 全文结论 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 作者简历 | 第67-68页 |
| 导师简介 | 第68-70页 |
